1、目的：通過研究枸杞多糖(LBP)對(duì)SD大鼠股骨骨折愈合過程中BMP-2和TGF-β1表達(dá)的影響,以及愈合過程中組織學(xué)和影像學(xué)表現(xiàn),探討LBP對(duì)骨折愈合的影響及其可能的作用機(jī)制。
　　方法：選用3月齡雄性SD大鼠140只,隨機(jī)分為4組:H組(LBP高劑量組)、L組(LBP低劑量組)、S組(傷科接骨片組)、W組(蒸餾水組),每組35只。均制備右側(cè)股骨干骨折模型,行克氏針?biāo)枨粌?nèi)固定。術(shù)后分別予以LBP160mg.(kg.d)-1、LBP

2、40mg.(kg.d)-1、傷科接骨片320mg.(kg.d)-1和等容量蒸餾水干預(yù),于骨折術(shù)后第2、4、6周每組各取10只大鼠通過對(duì)股骨大體標(biāo)本的觀察、骨痂體積測(cè)量、X線拍片和HE染色切片組織學(xué)檢查觀察骨折愈合情況,通過免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)骨痂組織中BMP-2和TGF-β1表達(dá)情況,SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件分析各組結(jié)果是否有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　結(jié)果：1.骨折愈合影像學(xué)表現(xiàn):骨折后第2周各組均可見骨痂形成,量少,主要位于折線遠(yuǎn)近端骨

3、外膜下,骨折線清晰可見;第4周各組大部分標(biāo)本均已完全形成骨性骨痂,有連續(xù)性骨痂通過骨折線,骨折線明顯模糊,達(dá)臨床愈合標(biāo)準(zhǔn);第6周各組均達(dá)骨性愈合標(biāo)準(zhǔn),骨折線消失。經(jīng)評(píng)分統(tǒng)計(jì)后,各期各組間比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　2.大體標(biāo)本觀察及骨痂體積的測(cè)量:骨折后第2周各組均可見明顯的骨痂形成,體積大,質(zhì)地略軟,拔除克氏針后斷端均有輕微活動(dòng),肉眼觀各組無區(qū)別;第4周時(shí)各組骨痂體積均變小、質(zhì)地變硬,拔除克氏針后斷端無活動(dòng),各組骨

4、痂質(zhì)地未見區(qū)別,肉眼觀H組、S組骨痂體積較L組、W組略大;第6周時(shí)各組骨痂體積進(jìn)一步縮小,部分標(biāo)本骨痂已消失,骨痂改建、塑形,肉眼觀各組未見區(qū)別。測(cè)量骨痂體積,經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理骨折后第4周H組、S組與L組、W組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其余各時(shí)期各組間比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　3.骨折愈合過程的組織學(xué)觀察:骨折后第2周:各組骨折線兩端的骨內(nèi)、外膜下均可見明顯的骨小梁形成,在其外圍可見大量軟骨細(xì)胞形成的軟骨島

5、,骨折斷端間為纖維性組織連接,S組與H組膜內(nèi)成骨量及軟骨島面積明顯大于L組與W組;骨折后第4周:各組骨小梁進(jìn)一步增多增粗,穿插排列,連接兩骨折斷端,S組與H組骨痂體積較大,骨小梁密度高,大部分標(biāo)本骨折斷端間有骨小梁相連接,L組與W組相對(duì)骨痂體積小,骨小梁纖細(xì)、稀疏,大部分標(biāo)本骨折斷端間仍為纖維性組織連接;骨折后第6周:S組與H組兩骨折斷端間骨小梁完全轉(zhuǎn)變?yōu)榘鍖訝罟?髓腔再通。L組與W組骨折斷端間仍可見大量骨小梁有序排列,逐漸向板層狀骨過

6、渡,部分標(biāo)本髓腔再通。依據(jù)NILSSON組織學(xué)分級(jí)標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行評(píng)分、統(tǒng)計(jì)處理,各期S組、H組與L組、W組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中第2周與第6周時(shí)具有顯著性差異(P<0.01)。
　　4.骨痂組織中BMP-2和TGF-β1表達(dá)情況:各組骨痂組織中成纖維細(xì)胞、軟骨細(xì)胞、成骨細(xì)胞和骨小梁中的骨細(xì)胞胞漿中均可見BMP-2的陽性表達(dá),各期各組間陽性表達(dá)的細(xì)胞種類不變,表達(dá)強(qiáng)度有所不同,隨著骨折愈合組織學(xué)演進(jìn),初期以成骨細(xì)胞、骨小

7、梁中的骨細(xì)胞及近骨痂外周部的幼稚軟骨細(xì)胞表達(dá)為主,后期以成骨細(xì)胞表達(dá)為主,各期S組與H組胞漿著色深度明顯大于L組和W組。測(cè)量各組BMP-2陽性表達(dá)的MOD值在骨折后第2、4、6周呈持續(xù)升高,骨折后第2、6周各組MOD值具有S組>H組>L組>W組特點(diǎn),骨折后第4周MOD值H組>S組>L組>W組。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)處理,骨折后第2周:S組與H組、L組、W組比較及H組與W組比較,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05),其中S組與W組比較具有顯著性差異(P<0

8、.01);骨折后第4、6周:S組、H組與L組、W組比較及第6周時(shí)L組與W組均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　TGF-β1表達(dá)與BMP-2表達(dá)相似,除在上述細(xì)胞表達(dá)外,在成纖維細(xì)胞也有強(qiáng)烈表達(dá),各組陽性表達(dá)MOD值的測(cè)量在骨折后第2、4周持續(xù)升高,第6周時(shí)下降,各期各組間陽性細(xì)胞著色深度及MOD值也具有S組>H組>L組>W組特點(diǎn),經(jīng)統(tǒng)計(jì)處理各期S組、H組與L組、W組比較,均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。
　　結(jié)論：1.

9、LBP能夠促進(jìn)骨痂組織中BMP-2和TGF-β1的表達(dá),其作用存在量-效依賴性,促進(jìn)BMP-2表達(dá)作用還存在給藥持續(xù)時(shí)間-效應(yīng)關(guān)系;2.LBP并不改變表達(dá)BMP-2、TGF-β1細(xì)胞種類,只對(duì)其表達(dá)強(qiáng)度有影響;3.LBP促進(jìn)骨痂組織中BMP-2表達(dá)作用在骨折愈合早期弱于傷科接骨片,促進(jìn)TGF-β1表達(dá)作用與傷科接骨片類似;4.LBP可以促進(jìn)膜內(nèi)成骨和軟骨內(nèi)成骨速度,促進(jìn)骨痂早期改建,塑形,但只表現(xiàn)在微觀結(jié)構(gòu)上,宏觀結(jié)構(gòu)上表現(xiàn)不明顯;5.