1、抗生素在口腔頜面部感染的治療中發(fā)揮著重要作用。研究發(fā)現(xiàn)牙周致病菌可侵入牙齦上皮細(xì)胞和成纖維細(xì)胞內(nèi)，以逃避宿主的防御機(jī)制；有些抗生素可在上述細(xì)胞內(nèi)及齦溝液中積聚，其濃度高于相應(yīng)血藥濃度，而有些藥物不能在細(xì)胞內(nèi)積聚，胞內(nèi)藥物濃度相近或低于相應(yīng)血藥濃度，這使得抗生素在應(yīng)用中益發(fā)復(fù)雜。研究細(xì)胞對(duì)不同抗生素?cái)z取機(jī)制對(duì)指導(dǎo)臨床用藥及提高藥效的發(fā)揮具有重要作用。牙周細(xì)胞對(duì)藥物的攝取及跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)是人工種植牙給藥系統(tǒng)以及牙根管給藥系統(tǒng)理論的重要基礎(chǔ)之一，

2、本課題組前期研究已發(fā)現(xiàn)牙周組織細(xì)胞可選擇性攝取部分常用抗生素，為進(jìn)一步探討這兩種給藥系統(tǒng)的可行性及規(guī)律，本文對(duì)牙周細(xì)胞攝取抗生素的機(jī)制進(jìn)行了初步研究，并建立和驗(yàn)證人牙周膜和牙齦成纖維細(xì)胞藥物轉(zhuǎn)運(yùn)模型。全文分兩大部分。
　　 第一部分人牙周膜和牙齦成纖維細(xì)胞攝取抗生素機(jī)制的初步研究
　　 實(shí)驗(yàn)一人牙周膜和牙齦成纖維細(xì)胞對(duì)甲硝唑及替硝唑攝取機(jī)制的研究
　　 目的：研究人牙周膜成纖維細(xì)胞(HPDLF)及人牙齦成纖維細(xì)胞

3、(HGF)對(duì)甲硝唑和替硝唑的攝取，探討攝取的方式及通過牙根管給藥的可行性。
　　 材料與方法：采用高效液相色譜法研究HPDLF及HGF分別與甲硝唑及替硝唑孵育后不同時(shí)間細(xì)胞內(nèi)藥物的濃度，細(xì)胞內(nèi)藥物濃度與細(xì)胞外藥物濃度的關(guān)系，以及溫度、pH和轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑丙磺舒和腺嘌呤對(duì)細(xì)胞攝取甲硝唑和替硝唑的影響。
　　 結(jié)果：孵育3min后HPDLF及HGF胞內(nèi)甲硝唑和替硝唑濃度即可達(dá)到細(xì)胞外水平；細(xì)胞內(nèi)甲硝唑和替硝唑濃度隨著細(xì)胞外甲硝唑

4、和替硝唑濃度的增加而呈線性增加；溫度、pH和轉(zhuǎn)運(yùn)抑制劑對(duì)HPDLF及HGF攝取甲硝唑和替硝唑無明顯影響。
　　 結(jié)論：HPDLF及HGF可快速攝取甲硝唑和替硝唑，證實(shí)了根管給藥的可行性；甲硝唑及替硝唑通過簡單擴(kuò)散方式進(jìn)入HPDLF及HGF細(xì)胞內(nèi)；甲硝唑與替硝唑在進(jìn)入HPDLF及HGF的動(dòng)力學(xué)之間沒有顯著差別，同時(shí)HPDLF與HGF間在攝取甲硝唑及替硝唑時(shí)也沒有差別。
　　 實(shí)驗(yàn)二有機(jī)離子轉(zhuǎn)運(yùn)體mRNA在人牙齦成纖維細(xì)胞上

5、的表達(dá)
　　 目的：檢測有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)家族及有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)家族在HGF的表達(dá)，并探討其在人牙齦成纖維細(xì)胞主動(dòng)轉(zhuǎn)運(yùn)中的作用。
　　 方法：采用RT—PCR法檢測有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體家族成員的mRNA在HGF上的表達(dá)。
　　 結(jié)果：HGF有OCT1、OCT2、OCTN1及OAT1—4 mRNA的表達(dá)。
　　 結(jié)論：證實(shí)了HGF存在有機(jī)陽離子轉(zhuǎn)運(yùn)體及有機(jī)陰離子轉(zhuǎn)運(yùn)體的推測。
　　 第二部分人

6、牙周膜及牙齦成纖維細(xì)胞藥物轉(zhuǎn)運(yùn)模型的建立及對(duì)部分口腔常用抗生素的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)
　　 實(shí)驗(yàn)一人牙周膜及牙齦成纖維細(xì)胞藥物轉(zhuǎn)運(yùn)模型的建立與驗(yàn)證
　　 目的：借鑒Caco-2細(xì)胞模型，建立HPDLF及HGF藥物轉(zhuǎn)運(yùn)模型，用以研究牙根管給藥系統(tǒng)及人工種植體牙給藥系統(tǒng)中牙周細(xì)胞對(duì)藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　 方法：將原代培養(yǎng)的HPDLF及HGF分別接種到Transwell聚酯濾膜上，連續(xù)以光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞的生長排列情況，測定跨膜電阻

7、，并以滲漏標(biāo)志物熒光素鈉等指標(biāo)進(jìn)行檢測。
　　 結(jié)果：HPDLF及HGF接種1周后細(xì)胞基本匯合，到2周時(shí)細(xì)胞連接緊密且完整，細(xì)胞呈復(fù)層生長，跨膜電阻分別達(dá)56.14±7.43及57.34±7.62Ω·cm-2，經(jīng)熒光素鈉孵育30分鐘檢測細(xì)胞旁滲漏小于1％。
　　 結(jié)論：所建模型在2周后細(xì)胞排列情況可模擬體內(nèi)牙周膜和牙齦生理狀態(tài)，且符合模型建立要求，可作為研究牙周細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)藥物的體外模型。
　　 實(shí)驗(yàn)二人牙周膜成纖維

8、細(xì)胞及牙齦成纖維細(xì)胞藥物轉(zhuǎn)運(yùn)模型對(duì)甲硝唑、替硝唑、米諾環(huán)素及頭孢噻肟鈉的轉(zhuǎn)運(yùn)
　　 目的：利用HPDLF及HGF藥物轉(zhuǎn)運(yùn)模型研究HPDLF及HGF對(duì)于部分口腔常用抗生素的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)，探討對(duì)不同藥物的轉(zhuǎn)運(yùn)規(guī)律。
　　 方法：在建立的HPDLF及HGF藥物轉(zhuǎn)運(yùn)模型，以高效液相色譜法測定HPDLF及HGF對(duì)甲硝唑等藥物的跨細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)。
　　 結(jié)果：甲硝唑、替硝唑及米諾環(huán)素經(jīng)7—8min即可完全被HPDLF及HGF跨細(xì)胞轉(zhuǎn)