1、目的：人腦膠質瘤是中樞神經系統(tǒng)中最常見的原發(fā)性腫瘤，目前臨床上雖采用多種治療方法，但由于其浸潤性生長及其本身內在放射抵抗性的特性，膠質瘤患者的預后仍不理想。試驗研究顯示：給予外源野生型p53，可以控制膠質瘤的生長；并且給予WTp53同時予以放療可以增強放射治療的療效。伽瑪刀與常規(guī)放療又有著明顯的差別，p53是否增強伽瑪刀治療的療效，在前期對于膠質瘤細胞系的研究中，初步認為是有效的，但在體應用后效果如何尚不清楚。 本研究第一部分應

2、用C6鼠腦膠質瘤模型，通過體內實驗，從分子生物學水平進一步探討伽瑪刀聯合p53基因治療膠質瘤的機理和療效。第二部分擬用siRNA干涉技術來降低DNA修復基因DNA-PK的調節(jié)亞基Ku70的表達，為后期的DNA-PK的RNA干涉治療聯合伽瑪刀放射外科治療作好準備。 方法：第一部分本實驗在建立C6鼠膠質瘤模型的基礎上，于6天后進行MRI檢查，確定成瘤后隨機分為4組，每組14只(包括對照組、立體定向伽瑪刀治療組、p53治療組及聯合治療

3、組)。Ad-p53經293包裝細胞進行病毒復制后，提取腺病毒，測定病毒滴度，備用。在動物模型建立后的第6、8天進行腺病毒介導的p53基因治療，并于2天后隨機處死一只大鼠進行Western雜交鑒定。第10天行立體定向伽瑪刀放射外科治療，給予邊緣劑量15Gy，治療后48小時每組處死6只大鼠進行生物學特性檢測，其余8只在伽瑪刀治療后1、2、4、8周進行MRI檢查，并觀察生存期及生存狀態(tài)，生物學特性檢測包括HE染色、PCNA，P21，Cycli

4、nD1(免疫組化法)，凋亡(TUNEL法)。 第二部分利用半定量PCR的方法，驗證了C6細胞系中表達Ku70；化學合成3個siRNA干涉序列，轉染C6腫瘤細胞系，依次分為干涉序列1、干涉序列2、干涉序列3、陰性對照組、空轉組、和空白對照組，于轉染siRNA48小時后，進行半定量PCR，用bandscan分析軟件分析，利用SPSS軟件進行數2據統(tǒng)計。 結果：第一部分經Western雜交鑒定Ad-p53成功導入體內C6腫瘤細

5、胞，并高表達p53蛋白。所有對照組大鼠均于21天以內死亡，平均生存時間18.7±0.45天；于56天觀察期內，p53治療組和伽瑪刀治療組分別有2、4只大鼠生存，生存率分別為25％和50％，而聯合治療組有6只生存，生存率為75％，結果行Kaplan-Meier曲線分析；MRI顯示治療組腫瘤體積較對照組明顯縮??；聯合治療組HE染色切片中，壞死范圍較單一伽瑪刀治療組明顯增大，但p53治療組與對照組比較變化不明顯；所有治療組PCNA表達均比對照

6、組下降，而聯合治療更加明顯(P＜0.001)；細胞周期蛋白cyclinD1明顯下調(P＜0.001)，細胞周期素蛋白依賴性激酶抑制因子p21明顯上調(P＜0.001)；TUNEL原位凋亡檢測證實，聯合治療組細胞凋亡率明顯高于單一治療組(P＜0.001)。 第二部分經SQ-RT-PCR檢測C6膠質瘤細胞高表達Ku70基因，轉染siRNA行序列優(yōu)選，表明干涉序列1可明顯降低Ku70基因的表達，與空白對照組差異明顯(P＜0.001)，

7、而干涉序列2、3與空白對照組無明顯統(tǒng)計學差異(P＞0.05) 結論：第一部分伽瑪刀放射外科治療C6荷瘤SD大鼠模型，可以使腫瘤細胞產生明顯的壞死，并隨著邊緣劑量的衰減，壞死程度逐漸減輕；并可抑制腫瘤生長，降低腫瘤的增殖率；下調細胞周期素D1，上調細胞周期依賴性激酶抑制因子p21，產生細胞周期阻滯；促進凋亡。p53治療C6荷瘤SD大鼠模型，可以抑制腫瘤生長，并產生細胞周期阻滯，促進凋亡的發(fā)生。伽瑪刀放射外科治療聯合p53基因治療C