1、聚乙二醇（PEG）修飾技術(shù)可以提高蛋白質(zhì)和多肽類藥物在體內(nèi)的循環(huán)半衰期，降低免疫原性和抗原性，從而改善藥物的藥代動力學(xué)和藥效。然而，常用的PEG修飾方法多是針對蛋白質(zhì)上ε-氨基的隨機修飾，反應(yīng)可控性差，修飾產(chǎn)物不均一，存在大量的二修飾以及多修飾產(chǎn)物，而且有較大產(chǎn)物的活性損失。
　　共價偶聯(lián)是一種化學(xué)交聯(lián)或化學(xué)修飾方法，是將一種多肽或蛋白質(zhì)偶聯(lián)在另一種大分子蛋白上，從而達到改善原肽或蛋白的溶解性和其他性質(zhì)。親和素與藥物可通過共價鍵相

2、連形成偶聯(lián)物，這樣不僅可以使藥物的分子量變大，避免被腎小球過濾，提高它在體內(nèi)的循環(huán)半衰期，也大大增強了藥物與受體蛋白的親和力，從而提高GLP-1四聚體偶聯(lián)物的生物活性，提升其藥效動力學(xué)性。本論文以胰高血糖素樣肽1為模型蛋白，采用異型雙功能試劑PEG/biotin-Mal與大分子載體Avidin（親和素）進行連接，以期穩(wěn)定生物活性和增強藥效。
　　首先制備GLP-Avidin偶聯(lián)產(chǎn)物。本論文采用異型雙功能PEG（biotin-PEG

3、3500-Mal）連接GLP-1，隨后 PEG另一端的biotin分別與親和素（Avidin）上的四個對稱的亞基配對，從而將4個GLP-1偶聯(lián)到Avidin上。采用分析型凝膠過濾柱Superdex200(1 cm×30 cm)檢測分析以及SDS-PAGE電泳法檢測偶聯(lián)物，得出最佳反應(yīng)條件。研究表明，4℃為最適反應(yīng)溫度；GLP-1:biotin-PEG-Mal:Avidin=4:1:0.5；GLP-1:(biotin- Mal):Avid

4、in=4:1:0.5作為最佳摩爾比條件。采用AKTA蛋白純化系統(tǒng)與制備型凝膠過濾柱Superdex200(2.6 cm×70 cm)制備偶聯(lián)產(chǎn)物。
　　其次對偶聯(lián)產(chǎn)物GLP-Avidin結(jié)構(gòu)和功能的表征。本論文用熒光光譜、動態(tài)光散射以及分析超離心等方法對GLP-1四聚體偶聯(lián)產(chǎn)物產(chǎn)物進行結(jié)構(gòu)表征。與未偶聯(lián)GLP-1的Avidin相比，本方法制備的四聚體偶聯(lián)產(chǎn)物的三級結(jié)構(gòu)未有明顯變化，流體力學(xué)半徑增大、表面疏水性輕微增大、修飾產(chǎn)物的不