1、地被菊(Chrysanthemum×morifolium Ramat.)是菊花中具有植株低矮、抗逆性強、管理粗放和花緊密等特點的一個品種群。由于其盛花期在“十一”前后，這一新型菊花已在很多地區(qū)得到推廣和應用。但是，這種新型菊花在我國北方應用受到的一個限制性因素就是在秋冬季露地生長情況下綠期較短。因此，開展培育耐寒性較強的品種并加以應用顯得尤為重要。大量的研究已表明CBF1轉錄因子能夠通過引起一些冷誘導基因的表達，從而達到提高植物總體的抗

2、寒能力。本試驗旨在通過對地被菊‘雪公主’高效再生體系及根癌農(nóng)桿菌介導的轉化體系的研究，將CICBF1轉錄因子導入到其中，以期望獲得抗性較強的新品種，并為廣泛運用轉基因技術改良菊花品種打下基礎。主要研究結果如下:
　　本研究以地被菊‘雪公主’為試驗材料，研究了不同激素濃度配比和葉片發(fā)育程度對葉片再生能力的影響，以及對莖段分化和生根誘導的影響。由此對‘雪公主’的再生條件進行了優(yōu)化，從而獲得了高效的再生體系。試驗結果表明，地被菊‘雪公主

3、’著生在植株頂端的幼嫩葉片比著生在植株基部的葉片分化率高;同一葉片基部的分化率高于中部;其最佳誘導分化培養(yǎng)基為MS+1.0mg·L-16-BA+0.6mg·L-1NAA;莖段增殖的最適培養(yǎng)基為MS+0.3mg·L-16-BA+0.2mg·L-1NAA;繼代培養(yǎng)為MS培養(yǎng)基;生根培養(yǎng)基為1/2MS+0.5mg·L-1NAA培養(yǎng)基;再生苗移栽后生長良好。
　　在高效再生體系建立的基礎上，利用根癌農(nóng)桿菌介導的遺傳轉化法對其遺傳轉化進行了

4、研究。試驗結果表明，最優(yōu)的轉化體系為:在最佳誘導分化培養(yǎng)基上經(jīng)過預培養(yǎng)1d的葉盤置于OD600為0.5～0.6的菌液中侵染10min，共培養(yǎng)2d后將葉盤接到MS+0.6mg·L-1NAA+1.0mg·L-16-BA+5mg·L-1Km+350mg·L-1Carb培養(yǎng)基上進行延遲篩選，3d后接種到MS+0.6mg·L-1NAA+1.0mg·L-16-BA+5mg·L-1Km+200mg·L-1Carb分化篩選培養(yǎng)基中，待分化出不定芽后，將

5、1.5cm左右的不定芽接到1/2MS+0.5mg·L-1NAA+4mg·L-1Km的培養(yǎng)基中進行生根篩選。利用此體系進行了穩(wěn)定的遺傳轉化，有效地提高了轉化效率。
　　本研究在經(jīng)過長期的卡那霉素生根篩選得到12株抗性植株的基礎上，分別提取獲得的抗性地被菊單株的DNA進行PCR擴增，擴增產(chǎn)物進行瓊脂糖凝膠電泳檢測分析，結果共獲得陽性植株2株，轉化率為0.67％。之后提取陽性植株的RNA進行RT-PCR檢測，得到了與陽性對照CICBF1