1、紫花苜蓿是一種優(yōu)質(zhì)的豆科牧草。它喜溫暖、半濕潤(rùn)半干旱的氣候，主要在我國(guó)黃河流域和西北地區(qū)種植。我國(guó)南方地區(qū)酸性土壤等環(huán)境，限制了紫花苜蓿的生長(zhǎng)。在酸性土壤中，鋁毒是影響苜蓿生長(zhǎng)的最重要的限制因子。因而提高紫花苜蓿對(duì)鋁毒的耐受性是解決紫花苜蓿順利引種到我國(guó)南方的關(guān)鍵之一。近年來(lái)，隨著人們對(duì)植物耐鋁機(jī)理的研究，分子生物技術(shù)的發(fā)展，特別是人們發(fā)現(xiàn)有機(jī)酸在植物抵御鋁毒機(jī)制中發(fā)揮著極其重要的作用，為人們可以通過(guò)分子手段使苜蓿體內(nèi)控制有機(jī)酸合成的相

2、關(guān)酶過(guò)量表達(dá)，提高紫花苜蓿對(duì)鋁毒的耐受性奠定了基礎(chǔ)。本研究通過(guò)農(nóng)桿菌介導(dǎo)的葉盤(pán)法將來(lái)源于大腸桿菌的光誘導(dǎo)型蘋(píng)果酸脫氫酶基因?qū)胱匣ㄜ俎Ｖ校鰪?qiáng)紫花苜蓿蘋(píng)果酸的合成和分泌，達(dá)到解鋁毒的作用。其主要研究結(jié)果如下： 確定篩選抗生素及脫菌抗生素的濃度。通過(guò)篩選實(shí)驗(yàn)，確定潮霉素的篩選方案為前期篩選，在愈傷組織誘導(dǎo)和分化階段篩選濃度以5mg/L為宜。結(jié)合抑菌實(shí)驗(yàn)，確定了在脫菌培養(yǎng)時(shí)愈傷組織誘導(dǎo)和分化階段Car濃度以500mg/L為宜。

3、 獲得了轉(zhuǎn)基因植株。對(duì)所獲得的29株抗性植株進(jìn)行PCR檢測(cè)，其中1株為轉(zhuǎn)基因陽(yáng)性植株，經(jīng)RT-PCR檢測(cè)驗(yàn)證了蘋(píng)果酸脫氫酶(MDH)基因在轉(zhuǎn)錄水平進(jìn)行了表達(dá)。 經(jīng)酶活性分析，轉(zhuǎn)基因植株的MDH活性較對(duì)照植株提高了16％。 在沒(méi)有鋁脅迫的情況下轉(zhuǎn)基因植株葉片中蘋(píng)果酸的含量比對(duì)照植株提高了1.6倍：在50μmol/L鋁離子脅迫下轉(zhuǎn)基因植株葉片中蘋(píng)果酸含量是對(duì)照植株葉片含量的3.4倍。 通過(guò)根尖耐鋁性測(cè)定及根系伸長(zhǎng)試