1、目的：糖尿病腎病(Diabetic Nephropathy，DN)是糖尿病最常見和最嚴(yán)重并發(fā)癥之一，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜。本實(shí)驗(yàn)通過研究黃芩苷對DN大鼠腎臟縫隙連接蛋白43磷酸化(p-Cx43)介導(dǎo)的縫隙連接(GJ)通訊功能影響，來探討GJ通訊在DN發(fā)生發(fā)展中的作用機(jī)制，為中醫(yī)藥防治DN開辟新道路。
　　方法：⑴動(dòng)物實(shí)驗(yàn)，在SPF環(huán)境下，飼養(yǎng)雄性SD大鼠70只，周齡8w，體重約180-220g。所有動(dòng)物先適應(yīng)飼養(yǎng)兩天，接著隨機(jī)分10只為

2、正常組和60只為DN造模組。正常大鼠給與普通飼料飼養(yǎng)，造模大鼠給與高脂飼料飼養(yǎng)。一個(gè)月后，造模大鼠給與單次腹腔注射1％鏈脲佐菌素（Streptozotocin，STZ），注射量按35mg/kg計(jì)算，同時(shí)，正常大鼠腹腔注射按此計(jì)量折算出的濃度為0.1mol/L枸櫞酸-枸櫞酸鈉緩沖液，注射前全部大鼠均禁食不禁水12h。5-7天后，采取剪尾取血法來測隨機(jī)血糖，測得隨機(jī)血糖值≥16.7 mmol/L，則糖尿病(DM)大鼠造模成功。此后，所有大鼠

3、繼續(xù)給與普通飼料飼養(yǎng)，8周后，若DM大鼠隨機(jī)血糖≥16.7 mmol/L，尿蛋白出現(xiàn)陽性，24h尿量大于正常組的50％，則診斷糖尿病腎病模型(Diabetic Nephropathy，DN)成功。將DN大鼠分成模型組、黃芩苷組和依那普利組，并分別以蒸餾水2ml/kg/d，黃芩苷0.16g/kg/d，依那普利1.05mg/kg/d進(jìn)行灌胃，6周末，所有大鼠稱重測血糖，麻醉后斷頭處死，取出雙腎，剔除包膜，左腎放入10％中性甲醛液中固定，病理

4、HE常規(guī)法觀察腎臟病理改變，免疫組化法檢測蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）與縫隙連接蛋白43磷酸化(p-Cx43)表達(dá)，右腎放到液氮中速凍后-80℃保存，用Western blot法檢測Cx43的磷酸化表達(dá)。⑵在細(xì)胞水平，采用低糖濃度（5.5mmol/L，LG），高糖濃度(25mmol/L，HG)，高糖+黃芩苷（100μmol/L），高糖+依那普利（10μmol/L），分別和HK-2共同培養(yǎng)，并觀察24h、48h、

5、72h三個(gè)不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞的增殖變化，運(yùn)用MTT法檢測各組HK-2的生長狀況。
　　結(jié)果：①給藥前，所有DM大鼠血糖都明顯高于正常大鼠，比較差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。給藥后，黃芩苷組、依那普利組血糖值較模型組降低，比較差異，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。且黃芩苷較依那普利降糖更明顯。②治療后，模型組、黃芩苷組和依那普利組三組大鼠腎指數(shù)均比正常組高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。同時(shí)，黃芩苷組和依那普利組腎指數(shù)比模型組均

6、低，比較差異，無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，且黃芩苷組較依那普利組略低。③治療后，模型組、黃芩苷組和依那普利組大鼠腎小球體積增大，腎系膜細(xì)胞有增生，腎小管上皮細(xì)胞水腫，與正常組有明顯區(qū)別。同時(shí)，黃芩苷組與模型組比較，腎臟病變減輕，且治療效果優(yōu)于依那普利組。④正常組腎小管上皮細(xì)胞膜未見PKC表達(dá)。模型組腎小管上皮細(xì)胞膜可見PKC棕黃色顆粒，為強(qiáng)陽性表達(dá)。黃芩苷組和依那普利組較模型組PKC棕黃色顆粒數(shù)量明顯減少，著色程度減輕，為中度陽性表達(dá)

7、。且黃芩苷組較依那普利組PKC陽性表達(dá)更低。⑤正常組腎小管上皮細(xì)胞膜可見p-Cx43弱陽性表達(dá)。模型組腎小管上皮細(xì)胞膜可見p-Cx43棕褐色顆粒，為強(qiáng)陽性表達(dá)。黃芩苷組和依那普利組較模型組p-Cx43棕褐色顆粒數(shù)量明顯減少，著色程度減輕，為中度陽性表達(dá)。且黃芩苷組p-Cx43陽性表達(dá)較依那普利組減弱。另外，腎臟p-Cx43蛋白表達(dá)的結(jié)果也同腎小管上p-Cx43陽性表達(dá)的趨勢一致。⑥分別測定HK-2在24h，48h，72h的生長情況，發(fā)現(xiàn)

8、高糖環(huán)境下HK-2細(xì)胞生長呈雙重效應(yīng)，高糖干預(yù)24h，細(xì)胞增殖增加;高糖干預(yù)48-72h，細(xì)胞明顯受到抑制，抑制率和時(shí)間成正比。黃芩苷干預(yù)后，隨著時(shí)間增加，細(xì)胞呈時(shí)間依賴性出現(xiàn)增殖現(xiàn)象，與模型組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)，且增殖效果優(yōu)于依那普利組。
　　結(jié)論：黃芩苷對高糖環(huán)境下糖尿病腎臟有改善作用。在動(dòng)物水平，黃芩苷能減輕DN大鼠腎臟結(jié)構(gòu)和功能損傷，并能改善腎臟縫隙連接通訊功能，其機(jī)制可能與其下調(diào)DN大鼠腎組織PKC和p-C