多重PCR分子診斷和p53、HBB基因點(diǎn)突變檢測(cè)研究及艾滋病基因治病相關(guān)前期研究.pdf_第1頁(yè)
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文檔簡(jiǎn)介

1、第一部分,介紹由“公共引物”介導(dǎo)的多重PCR技術(shù)的應(yīng)用研究。
   目的:建立由“公共引物”介導(dǎo)的PCR反應(yīng)體系及條件以期進(jìn)一步用于多重PCR體系的建立。
   方法:以噬菌體基因組為參考序列設(shè)計(jì)“公共引物”序列,并以人類(lèi)基因組為模板檢測(cè)“公共引物”結(jié)合“嵌合引物”的特異性及靈敏性。
   結(jié)果:“公共引物”具有高特異性、高敏感性的特點(diǎn),“公共引物”結(jié)合“嵌合引物”P(pán)CR反應(yīng)體系可大幅降低“嵌合引物”濃度。

2、>   結(jié)論:由“公共引物”介導(dǎo)的PCR反應(yīng)體系可大幅降低引物間相互作用概率,為多重PCR體系的建立奠定基礎(chǔ)。
   第二部分,突變敏感性“分子開(kāi)關(guān)”檢測(cè)p53、HBB基因熱點(diǎn)突變。
   目的:利用突變敏感性“分子開(kāi)關(guān)”技術(shù)建立對(duì)p53、HBB基因熱點(diǎn)突變的檢測(cè)體系。
   方法:利用PCR及基因克隆技術(shù)得到p53、HBB基因野生及突變模板質(zhì)粒。設(shè)計(jì)硫化修飾引物,利用突變敏感性“分子開(kāi)關(guān)”技術(shù)對(duì)突變位點(diǎn)進(jìn)行檢

3、測(cè)。
   結(jié)果:當(dāng)硫化修飾檢測(cè)引物與突變模板配對(duì)時(shí),反應(yīng)得以進(jìn)行,有PCR產(chǎn)物;與野生模板不配對(duì)時(shí),反應(yīng)非成熟性終止,無(wú)PCR產(chǎn)物。
   結(jié)論:突變敏感性“分子開(kāi)關(guān)”技術(shù)能夠快速檢測(cè)p53、HBB基因突變位點(diǎn),達(dá)到非此即彼的二元化效果。
   第三部分,TALENs蛋白酶在艾滋病基因治療應(yīng)用的前期研究。
   目的:構(gòu)建具有剪切CCR5基因的TALENs腺病毒包裝載體,并建立相應(yīng)的蛋白酶活性檢測(cè)系統(tǒng)。

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