1、角膜內皮細胞形態(tài)學上的完整和功能上的健全是臨床上評價角膜功能的指標,也是角膜保存質量評定的標準.觀察藥物及一些因素對角膜內皮細胞活性的影響離不開角膜內皮細胞的體外試驗,而體外試驗的成功也依賴于良好的角膜內皮細胞培養(yǎng).角膜內皮盲是角膜病的一種常見病,角膜內皮細胞的體外培養(yǎng)對于角膜生物學、病理學、藥理學以及角膜移植的研究具有重要的意義,也是體外構建組織工程化人工角膜的重要研究內容之一.該論文通過對角膜內皮細胞體外原代培養(yǎng)和傳代培養(yǎng)的方法進行

2、篩選和優(yōu)化,確定角膜內皮細胞原代培養(yǎng)的方法;揭膜培養(yǎng)法:角膜緣內1mm揭取角膜內皮細胞層,貼于瓶底,使其貼壁生長,可以獲得六角形單層內皮細胞.不使用Trypsin,避免酶對內皮細胞的損傷.不需較多材料.消化培養(yǎng)法:材料較多時,采用消化培養(yǎng)法,培養(yǎng)中需控制Trypsin的消化時間和濃度;接種細胞易貼壁.組織塊培養(yǎng)法:角膜材料較少,采用組織貼片培養(yǎng)法,方法簡便易行,細胞時間和濃度;接種細胞易貼壁.組織塊培養(yǎng)法:角膜材料較少,采用組織貼片培養(yǎng)

3、法,方法簡便易行,細胞遷出和生長速度較快,避免了Trypsin對細胞的損傷,細胞生長形態(tài)正常.通過研究,確定了角膜內皮細胞最適培養(yǎng)液為DMEM/F12(1:1).實驗結果表明其生長效果較好.角膜內皮細胞傳代培養(yǎng)方法:從酶的濃度、酶的用量、酶作用的時間、洗滌離心等方面進行了研究,得到了適合角膜內皮細胞的傳代方法.首次進行了促進角膜內皮細胞生長的海洋生物提取物的篩選研究,以解決內皮細胞生長緩慢,傳代困難的問題.角膜內皮細胞在多糖生物膜材料上