1、目的:從生化實(shí)驗(yàn)和細(xì)胞實(shí)驗(yàn)水平，運(yùn)用分子生物學(xué)技術(shù)，探討VPO1對NO的氧化機(jī)制及VPO1在內(nèi)皮細(xì)胞NO代謝中的作用。
　　 方法:實(shí)驗(yàn)分為三部分:(1)體外實(shí)驗(yàn):用探針法實(shí)時(shí)監(jiān)測VPO1與NO的反應(yīng)，以及Cl-或Br-對該反應(yīng)的影響，并用Griess試劑檢測該反應(yīng)的氧化產(chǎn)物。(2)用NO分析儀檢測GJ-4細(xì)胞（穩(wěn)定轉(zhuǎn)染了VPO1的HEK293細(xì)胞）內(nèi)的NO水平，并通過APF熒光檢測法檢測細(xì)胞內(nèi)VPO1的活性。(3)通過West

2、ern Blot檢測各種血管活性物質(zhì)刺激后內(nèi)皮細(xì)胞VPO1，Nox-4，iNOS的蛋白表達(dá)情況，以及內(nèi)皮細(xì)胞中的NO含量。
　　 結(jié)果:(1)體外實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)VPO1能與NO發(fā)生反應(yīng)，氧化產(chǎn)物之一為硝酸鹽;Cl-和Br-能競爭性抑制MPO對NO的消耗，而Cl-對VPO1與NO反應(yīng)無明顯影響。(2) GJ-4細(xì)胞中的NO含量明顯低于對照組，而VPO1的活性明顯高于對照組。(3) LPS(100 ng/ml)和TNF-a(2 ng/ml