1、中南大學(xué)博士學(xué)位論文一種新型基因載體—納米級超聲微泡的制備及其介導(dǎo)PNPFludarabine自殺基因系統(tǒng)治療肝癌的實驗研究姓名：張波申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：何剪太20100501中南大學(xué)博士學(xué)位論文因治療手段提供實驗基礎(chǔ)。[方法]1、選擇DPPC、DPPA混合磷脂以及全氟丙烷氣體等材料采用高剪切分散法進行納米級超聲微泡的研制，并通過均勻設(shè)計法選擇最優(yōu)制備方法。2、采用MTT法檢測不同濃度的納米級超聲微泡對HepG2肝癌

2、細胞的細胞毒性，選擇安全濃度范圍；以GFP為目的基因，通過熒光顯微鏡、流式細胞儀以及實時熒光PCR法檢測納米級超聲微泡與DNA質(zhì)粒的結(jié)合效率和體外基因轉(zhuǎn)運效率，并與相同條件下脂質(zhì)體的轉(zhuǎn)運效率進行比較，以及超聲照射后納米級超聲微泡對目的基因轉(zhuǎn)染效率的改變。3、選用真核基因表達系統(tǒng)pcDNA31()和PNP自行構(gòu)建自殺基因表達質(zhì)粒pcDNA31()IPNP，基因克隆鑒定采用限制酶SalI和EcoRV雙酶切鑒定、PCR鑒定以及重組質(zhì)粒核酸序列

3、測定。4、以超聲照射介導(dǎo)自制的納米級超聲微泡作為基因轉(zhuǎn)運系統(tǒng)，以自行構(gòu)建的自殺基因表達質(zhì)粒pcDNA31()／PNP作為治療基因，并以Fludarabine前藥處理進行肝癌的基因治療研究。先用RT—PCR方法檢測兩株細胞系中PNP的表達情況；再以AFP高表達的HepG2細胞與AFP低表達的SMMC7721細胞為實驗材料，將重組質(zhì)粒pcDNA31()／PNP轉(zhuǎn)染入各組實驗細胞，采用MTT法檢測PNP／Fludarabine系統(tǒng)對兩種肝癌細