1、我們研究目的是證實臍血中單個核細胞通過適當培養(yǎng)條件可以分化形成具有內皮細胞特征的細胞,并應用新生犬外周血單個核細胞模擬臍血單個核細胞移植進入缺血心肌組織,觀察細胞活性及其對左室重構的影響,探討細胞移植治療心肌缺血的有效性.第一部分 臍血單個核細胞培養(yǎng)及培養(yǎng)細胞特性觀察;目的:研究能否從臍血中分離內皮前體細胞,并對此類細胞進行培養(yǎng)和鑒定.結果:梯度離心法獲取的外周血單個核細胞活細胞百分率92±4﹪,臍血單個核細胞95±3﹪,兩組無差別,外

2、周血單個核細胞CD34陽性率僅為3±0.6﹪,臍血陽性率22±4﹪,后者明顯高于前者.臍血單個核細胞48h后貼壁細胞生長良好,出現(xiàn)梭形細胞.培養(yǎng)早期可見圓形細胞類似于白細胞,但培養(yǎng)10d后圓形細胞明顯減少.培養(yǎng)細胞過程中可見細胞呈現(xiàn)梭形,部分細胞伸展.貼壁細胞可排列成條索狀.高倍鏡下這些細胞的核較大,部分細胞可見分裂相,貼壁細胞KDR,VE-cadherin,CD34陽性,僅有少量貼壁細胞表達CD45.超過95﹪的貼壁細胞能夠攝取DiI

3、-ac-LDL.RT-PCR提示分離培養(yǎng)的單個核細胞含有eNOS和FLT-1/VEGF receptor-1 mRNA.第二部分 新生犬單個核細胞缺血心肌移植后細胞活性及其對左室重構影響的研究;目的:應用新生犬外周血單個核細胞模擬臍血單個核細胞移植進入缺血心肌組織,觀察細胞活性和其對左室重構的影響,探討該細胞移植治療心肌缺血的有效性.結論:1.臍血中分離單個核細胞方法簡單,CD34<'+>細胞率較外周血高.2.在有VEGF,bFGF和I

4、GF-1存在的條件下培養(yǎng)臍血單個核細胞所獲得的大量貼壁細胞具有內皮細胞特性,生長速度和數量較外周血有明顯優(yōu)勢.3.建立了犬結扎前降支心肌缺血模型,在術后早期及30d觀察到嚴重心肌缺血后出現(xiàn)心室擴張,左室輪廓呈球形,收縮和舒張功能降低,心肌應力增加,心房出現(xiàn)代償性收縮增強和張力增加,心肌出現(xiàn)纖維化,證實心肌缺血后左室重構是一個慢性進行性過程.4.首先應用新生犬(出生后5h)外周血單個核細胞進行缺血心肌內移植,由于其成分與臍血相似,開拓了實