1、粘附是致病菌對(duì)宿主進(jìn)行感染的關(guān)鍵，病原菌通過(guò)粘附因子可在宿主的體表或特定組織定植，入侵增殖并發(fā)揮毒力。近年來(lái)，粘附已經(jīng)被認(rèn)為是致病菌的一個(gè)毒力因子。關(guān)于臨床病原菌粘附的研究得到廣泛關(guān)注，但水產(chǎn)病原菌粘附及粘附機(jī)制的研究還相當(dāng)欠缺。
　　本研究以水產(chǎn)養(yǎng)殖業(yè)中重要的病原菌嗜水氣單胞菌W菌株為研究對(duì)象，首先采用改良后的間接ELISA法研究了嗜水氣單胞菌（Aeromonas hydrophila）的粘附特性。結(jié)果表明，嗜水氣單胞菌對(duì)鰻鱺的

2、表皮粘液具有良好的粘附作用，且其粘附能力受初始菌液的濃度、溫度、孵育時(shí)間、pH值、離子濃度以及營(yíng)養(yǎng)要素等環(huán)境因子影響。
　　在充分了解嗜水氣單胞菌粘附特性的基礎(chǔ)上，通過(guò)轉(zhuǎn)座子標(biāo)簽技術(shù)構(gòu)建嗜水氣單胞菌野生型菌株 W的突變庫(kù)，并從突變庫(kù)中篩選到9株粘附能力穩(wěn)定下降的突變菌株。PCR鑒定證明這些突變株為轉(zhuǎn)座子 mini-Tn10插入突變， southern雜交證明這些突變株中mini-Tn10均為單位點(diǎn)插入。Genome walking

3、技術(shù)擴(kuò)增突變株插入位點(diǎn)的側(cè)翼序列，經(jīng)過(guò)克隆、測(cè)序得到側(cè)翼基因序列信息。通過(guò)序列比對(duì)分析，結(jié)果顯示：121號(hào)突變株轉(zhuǎn)座子插入位點(diǎn)均為flgC基因，45號(hào)突變株的插入位點(diǎn)為調(diào)控CobQ/CobB/MinD/ParA蛋白家族的基因，77號(hào)突變株的插入位點(diǎn)為flgN基因，196基因的插入位點(diǎn)為RbsR基因以及261號(hào)突變株的插入位點(diǎn)為CydDC基因，而163號(hào)突變株的插入位點(diǎn)側(cè)翼序列在NCBI中沒(méi)有找到同源序列。
　　進(jìn)一步對(duì)flgC基因

4、在嗜水氣單胞菌粘附中的功能進(jìn)行研究。首先將flgC基因及其RBS位點(diǎn)克隆至表達(dá)載體pACYC184構(gòu)建重組表達(dá)質(zhì)粒pACYC184+flgC,然后將重組表達(dá)載體電轉(zhuǎn)至相應(yīng)突變株中，構(gòu)建補(bǔ)償菌株。Western blotting證實(shí)重組表達(dá)載體中flgC可在突變株中得到表達(dá)。對(duì)野生株、突變株、補(bǔ)償株的運(yùn)動(dòng)、粘附及生物膜形成等表型特征進(jìn)行了比較。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，與野生型和互補(bǔ)菌株相比，flgC基因突變株在運(yùn)動(dòng)、粘附及生物膜形成等方面都明顯降低，表