1、目的:類風濕關節(jié)炎(rheumatoid arthritis，RA)是自身免疫性疾病的一種，其以全身關節(jié)炎癥、破壞為主要臨床表現(xiàn)，本病以慢性、對稱性、破壞性多關節(jié)炎為主要特征，其中主要受累靶關節(jié)為近端指間關節(jié)、掌指關節(jié)和腕關節(jié)，其他如顳關節(jié)、肘關節(jié)、踝關節(jié)也常常累及。部分患者還可出現(xiàn)發(fā)熱、貧血、皮下結節(jié)等關節(jié)外表現(xiàn)。RA的基本病理特點主要是關節(jié)滑膜的慢性炎癥，關節(jié)滑膜經(jīng)過以下幾個發(fā)展階段:滑膜充血、水腫、增生，最終逐漸形成血管翳，滑膜組

2、織因而增厚并且過度滲出包含多種細胞因子的滲液，滲出的細胞因子可侵犯關節(jié)軟骨，引起骨質(zhì)的破壞，對關節(jié)周圍的組織也可侵及，包括腱鞘、肌肉等，其破壞與腫瘤的損害過程相似，破壞過程的主要步驟是新的血管的形成與細胞外基質(zhì)的降解。治療的關鍵在于減緩骨侵蝕的速度，通過控制細胞炎性因子的釋放和減慢血管翳的形成。目前臨床上常使用改變病情藥(disease modifying anti-rheumatic drug，DMARDs)聯(lián)合生物制劑治療RA以預防

3、、延緩骨質(zhì)破壞。但生物制劑的治療成本高，廣泛應用有局限性。近期有研究提示，青蒿琥酯可作為一種潛在的免疫抑制劑，具有低毒，高效的特點。其屬于青蒿素的一種半合成衍生物。并且研究發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯發(fā)揮作用的機制是通過調(diào)節(jié)NF-κB的信號通路，抑制受LPS調(diào)控的滑膜細胞中TNF-α的分泌。從而抑制RA滑膜炎癥，同時還可通過抑制IL-17分泌及調(diào)節(jié)這兩種細胞因子的協(xié)同性而抑制滑膜炎癥反應，從而減少骨侵蝕和骨破壞。CD4+CD25+調(diào)節(jié)性T細胞(regu

4、latory T cells，Treg cells)是一群免疫調(diào)節(jié)細胞，可以調(diào)控T淋巴細胞的免疫反應，其關鍵的作用是在機體免疫過程中維持免疫耐受、防止自身免疫性疾病發(fā)生。Foxp3是一種轉錄因子，作為調(diào)節(jié)性T細胞的特異性標志，決定了CD4+CD25+T調(diào)節(jié)細胞的相關功能如發(fā)育、表達和維持免疫功能。
　　本研究通過建立膠原誘導性關節(jié)炎的大鼠動物模型，觀察不同劑量青蒿琥酯干預下Foxp3在大鼠膠原誘導性關節(jié)炎滑膜細胞中的表達，探討青蒿

5、琥酯對Foxp3相關信號通路活化的調(diào)控作用，研究青蒿琥酯是否通過上調(diào)轉錄因子Foxp3(forkhaed/winged helix transcription factor，翼狀螺旋/叉頭轉錄因子)而起作用下調(diào)IL-17的活性而起免疫調(diào)節(jié)作用，明確青蒿琥酯確切的治療靶位。
　　方法:建立Ⅱ型膠原誘導(collagen induced arthritis，CIA)的雄性Wistar大鼠模型，通過觀察指標評估發(fā)病程度。取滑膜并將滑膜細

6、胞培養(yǎng)至5-7代，分為正常對照組、關節(jié)炎組隨機分為CIA模型對照組、不同濃度青蒿琥酯組、甲氨蝶呤(MTX)組、硫酸羥氯喹組、甲基潑尼松龍組干預，應用逆轉錄多聚酶鏈反應法(RT-PCR)檢測Foxp3在不同組大鼠CIA滑膜細胞中的基因表達，western blotting檢測Foxp3在不同組大鼠CIA滑膜細胞中的蛋白表達。
　　結果:
　　1.CIA大鼠造模成功率達93.3％(56/61)。
　　2.臨床評估指標:模型

7、組大鼠與正常大鼠比較，有以下表現(xiàn):體重減輕，活動量減少，精神欠佳等;造模后關節(jié)炎癥狀進行性加重，以對稱性后肢關節(jié)受累明顯;免疫后第6周關節(jié)炎癥狀達高峰，后逐漸進入慢性期，出現(xiàn)關節(jié)強直、畸形。
　　3.踝關節(jié)鉬靶拍片:CIA大鼠第10周影像學改變:骨質(zhì)疏松、關節(jié)軟骨侵蝕、骨破壞、關節(jié)間隙狹窄;CIA大鼠第21周影像學改變:明顯的骨質(zhì)疏松、關節(jié)軟骨侵蝕、嚴重骨破壞、關節(jié)損毀，部分呈半脫位。
　　4.基因表達:各藥物干預組成纖維樣

8、滑膜細胞較CIA模型組減少，F(xiàn)oxp3表達增加，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。20ng/ml青蒿琥酯組Foxp3表達高于5ng/ml青蒿琥酯、10ng/ml青蒿琥酯、MTX組、硫酸羥氯喹組及甲基潑尼松龍組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　5.蛋白表達:各藥物干預組增生的滑膜細胞較CIA模型組減少，F(xiàn)oxp3較CIA模型組表達增加，各組間差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。20ng/ml青蒿琥酯組Foxp3表達高于5

9、ng/ml青蒿琥酯、10ng/ml青蒿琥酯、MTX組、硫酸羥氯喹組及甲基潑尼松龍組，差異有統(tǒng)計學意義(P＜0.05)。
　　結論:
　　1.在CIA大鼠模型中:關節(jié)炎指數(shù)(AI)≥6分;關節(jié)腫脹度、骨質(zhì)疏松、骨破壞等表現(xiàn)均較正常組嚴重。
　　2.青蒿琥酯可上調(diào)T淋巴細胞Foxp3的表達，在其干預下Foxp3在膠原誘導性關節(jié)炎大鼠滑膜細胞中的表達隨著劑量的加大而明顯增加，與劑量呈正相關。20ng/ml青蒿琥酯組Foxp3