1、松墨天牛是重大森林植物檢疫性病害-松材線蟲病的主要媒介昆蟲。本文主要內(nèi)容是篩選防治松墨天牛的金龜子綠僵菌優(yōu)良菌株，并研究金龜子綠僵菌在森林生態(tài)系統(tǒng)中的宿存動(dòng)態(tài)，為利用天敵微生物防治松墨天牛提供菌株資源和理論依據(jù)。 從福建的40個(gè)縣(市、區(qū))、江西省井岡山和吉安2個(gè)市，共110個(gè)林分樣區(qū)(其中松林88個(gè)樣區(qū))采集土壤樣品330份，采用選擇性培養(yǎng)基分離土壤金龜子綠僵菌，結(jié)果21個(gè)樣區(qū)(其中松林16個(gè))的26份土樣中分離到金龜子綠僵菌

2、，占采集樣區(qū)數(shù)的19.1％和樣品數(shù)的7.9％，土壤成菌落數(shù)(CFU)500-72500 CFU·g<'-1>，表明金龜子綠僵菌在森林土壤中有較為廣泛的分布。 對(duì)國內(nèi)外20株分離自不同寄主的金龜子綠僵菌菌株的產(chǎn)孢情況、孢子萌發(fā)率進(jìn)行了研究。在此基礎(chǔ)上，采用幼蟲(3～4齡)浸漬法(1×10<'7>孢子·mL<'-1>)和成蟲跗節(jié)接種法測(cè)定對(duì)松墨天牛的致病力。結(jié)果不同菌株間產(chǎn)孢量、孢子萌發(fā)率和致病力存在顯著差異，MaYTTR-04、M

3、aYTTR-03、MaZPTR-01、MaJGSTR-01、JPMa1291、JPMa1349、JPMa2049等7個(gè)菌株表現(xiàn)較為優(yōu)良；尤其是MaYTTR-04、MaYTTR-03、JPMa2049等3個(gè)菌株的綜合性狀最好，產(chǎn)孢量分別為(2.18±0.12)×10<'8>、(1.25±0.05)×10<'8>、(8.92±0.16)×10<'7>孢子·cm<'-2>；對(duì)幼蟲死亡的高峰期在15～18d，在接種后21d僵蟲率分別為80.0％

4、、76.0％和93.1％；3個(gè)菌株對(duì)成蟲的死亡高峰期在12～15d，接種后21d校正死亡率分別達(dá)93.3％(1.2×10<'6>±2.0×10<'5>孢子/成蟲)、86.7％(1.5×10<'6>±5.0×10<'5>孢子/成蟲)和94.4％(3.4×10<'6>±3.24×10<'5>孢子/成蟲)，僵蟲率分別達(dá)83.4％、88.9％和75.0％，其中Ⅱ級(jí)僵蟲(孢子覆蓋蟲體50％以上)分別為66.7％、55.6％和53.1％。

5、MaYTTR-04菌株在25±1℃恒溫條件下，接種量為2.3×10<'6>±0.2×10<'6>孢子/成蟲、2.3×10<'5>±0.2×10<'5>孢子/成蟲的情況下時(shí)間效應(yīng)指標(biāo)值LT<,50>分別為14.7d和18.5d；而室溫條件下(25℃～32℃)，這兩個(gè)劑量相應(yīng)的LT<,50>分別為12.9d和17.9d，表明該菌在較高的變溫環(huán)境下仍具有較強(qiáng)致病力。林間套籠21d成蟲平均死亡率為60％，僵蟲率為48.9％。 將JPMa

6、1349、JPMa2049金龜子綠僵菌孢子置于馬尾松樹干表皮不同方位；將JP1349、JP2049、MaZPTR-01菌株孢子與土粉混合后埋入馬尾松純林、馬尾松與木荷混交林和馬尾松純林林窗等不同林分結(jié)構(gòu)的土壤中；將MaYTTR-04菌株感染的松統(tǒng)中的宿存動(dòng)態(tài)。JPMa1349、JPMa2049菌株在樹干上的孢子，至168d仍有70％以上的萌發(fā)率(拐點(diǎn)萌發(fā)率，2005年1月31日～7月18日)；同一菌株在不同方位的萌發(fā)率存在一定差異，偏東

7、方向保持拐點(diǎn)萌發(fā)率時(shí)間較長，JPMa1349、JPMa2049菌株分別為196d、168d；偏西方向則較短，分別為163d、147d。兩個(gè)菌株70％以上萌發(fā)率平均拐點(diǎn)天數(shù)分別為166d和157d，差異不顯著。試驗(yàn)前期萌發(fā)率較為整齊，標(biāo)準(zhǔn)差大多在10％以下，后期不同處理位點(diǎn)的萌發(fā)率差異較大。氣溫是影響孢子萌發(fā)的主要因子之一，樹干表皮孢子萌發(fā)率隨著溫度升高而下降，萌發(fā)率急速下降產(chǎn)生拐點(diǎn)的日期從5月開始，6～7月份下降最快，月平均溫度28℃左

8、右是孢子萌發(fā)率下降的一個(gè)明顯拐點(diǎn)。綠僵菌和白僵菌在樹干上宿存萌發(fā)率的趨勢(shì)是一致的，同一時(shí)間段萌發(fā)率不存在顯著差異。 在試驗(yàn)地土表平均含孢量2.01×10<'8>孢子/成蟲的松墨天牛成蟲僵蟲，經(jīng)28d孢子量減少了2.14倍，至42d平均含孢量保持在7.01×10<'7>孢子/成蟲，到84d后含孢量降低到5.02×10<'6>孢子/成蟲水平，與成蟲跗節(jié)粘取孢子量(接種量)是同一數(shù)量級(jí)。在林間126d內(nèi)，各僵蟲體上的孢子萌發(fā)率雖然存在

9、顯著差異，但平均萌發(fā)率均保持在90％以上；僵蟲體上的孢子在接種濃度×10<'6>孢子·mL<'-1>數(shù)量級(jí)情況下，接種松墨天牛幼蟲后的校正死亡率仍有45.6％。 研究了JPMa1349、MaZPTR-01菌株在不同林分土壤中的萌發(fā)率，結(jié)果表明參試的菌株都一直保持在70％以上的較高水平。孢子在土壤中經(jīng)29d，數(shù)量分別下降到初始的27.8％和51.4％，在323d內(nèi)保持在10<'7>孢子·g<'-1>土壤以上水平，在211d內(nèi)對(duì)松墨

10、天牛幼蟲致死率和僵蟲率分別仍保持在55％和45％以上。 昆蟲病原菌自動(dòng)攜播器已獲實(shí)用新型專利(專利號(hào)：ZL2005 2 009534.3.7)。本實(shí)用新型屬于一種昆蟲病原菌自動(dòng)攜播裝置，它是由上部的誘捕器和下部的攜播器組成。其特征在于攜播器內(nèi)壁上半部放有病原菌的環(huán)帶，當(dāng)進(jìn)入攜播器的昆蟲通過環(huán)帶逃逸時(shí)，病原菌黏附于蟲體上伴隨昆蟲而擴(kuò)散，尤其是可隨小蠹類等蛀干害蟲將病原菌帶入樹干內(nèi)，使松墨天牛等在樹干內(nèi)部為害的幼蟲感染病原菌的機(jī)會(huì)大

11、大提高。林間試驗(yàn)攜播器懸掛點(diǎn)松墨天牛幼蟲感染金龜子綠僵菌僵蟲率比對(duì)照高32.1％。攜播器可在農(nóng)林害蟲防治中推廣應(yīng)用。 對(duì)綠僵菌遺傳多樣性進(jìn)行了ISSR分析，結(jié)果7個(gè)ISSR引物在30個(gè)菌株中共擴(kuò)增出81條帶，其中76條為多態(tài)條帶，多態(tài)性為93.82％，平均每個(gè)引物擴(kuò)增出11.6條帶。通過POPGEN軟件分析發(fā)現(xiàn)不同綠僵菌居群間和居群內(nèi)均存在一定的遺傳變異。根據(jù)個(gè)體間的遺傳距離進(jìn)行UPGMA聚類分析，結(jié)果顯示綠僵菌遺傳多樣性與地理