1、第一部分 目的:鑒定中國人群中一例HLA-B新等位基因. 方法:樣本DNA抽提采用G&T抽提試劑盒，采用PCR-SSP方法進行中低分辨分型，并應用基因克隆和DNA測序技術對先證者HLA-B基因的外顯子2和3進行序列分析，與已知等位基因序列進行比對。先證者爺爺?shù)难鍖W分型采用標準的微量淋巴細胞毒試驗方法，家系調(diào)查采集了先證者的父母、以及先證者的爺爺和奶奶的血樣。 結(jié)果:PCR-SSP分型根據(jù)試劑格局無法判定結(jié)果，經(jīng)

2、克隆測序發(fā)現(xiàn)該等位基因和B<'*>1502序列的差異只是在外顯子3區(qū)域中360位G->C，導致相應的密碼子120由谷氨酰胺變?yōu)榻M氨酸。血清學分型結(jié)果表明新等位基因血清學特異性為B15寬特異性。家系研究顯示先證者帶有的B<'*>9512等位基因系來自其爺爺，并經(jīng)過三代遺傳。攜帶該等位基因的HLA單倍型為A<'*>11，B<'*>9512，DRB1<'*>14。在大約20000名隨機捐獻者的檢測中，未發(fā)現(xiàn)其他帶有B'9512基因的個體，據(jù)此

3、估計B<'*>9512在四川地區(qū)人群中的基因頻率小于0.0001。 結(jié)論:該等位基因為HLA新等位基因，2006年2月世界衛(wèi)生組織HLA因子命名委員會正式將其命名為HLA-B*9512。 第二部分 目的:采用聚合酶鏈反應一序列分析基礎上的HLA分型(polymerasechain reaction-sequence based typing，PCR-SBT)方法，研究中國造血干細胞捐獻者資料庫(CMDP)四川分庫

4、中四川籍漢族人群HLA-B<'*>15組等位基因的分布特點，初步探討四川籍移植供患者對中可能存在的HLA-B<'*>15等位基因水平上的錯配模式及其在臨床非血緣造血干細胞移植供者選擇中的作用。 方法:從中國造血干細胞捐獻者資料庫四川分庫中四川籍漢族人群中/低分辨分型HLA-B<'*>15陽性樣本中按不同血清學特異性分層抽取105例樣本，應用PCR-SBT技術進行測序分型，獲得四川籍漢族人群HLA-B<'*>15組高分辨分型結(jié)果。

5、應用方根法計算HLA-B<'*>15各等位基因頻率并采用最大似然法計算兩座位和三座位單倍型頻率。同時與其他人群資料進行比較，并進一步探討中國四川籍患者在中國造血干細胞捐獻者資料庫中尋找供者時可能存在的HLA-B<'*>15等位基因水平上的錯配模式。 結(jié)果:(1)共檢測到16種已知HLA-B<'*>15等位基因和1例未知等位基因。本研究中檢出的16種等位基因有：B<'*>15010101(B62)，B<'*>1502(B75)，B

6、<'*>1503(B72)，B<'*>1505(B62)，B<'*>1507(B62)，B<'*>151101(B75)，B<'*>1512(B76)，B<'*>1513(B77)，B<'*>1517(B63)，B<'*>1518(B71)，B<'*>1525(B62)，B<'*>1527(B62)，B<'*>1529(B15)，B<'*>1532(B62)，B<'*>1546(B72)，B<'*>1558(B62)。其中以B<'*>1

7、502(36.8％)最常見，其次為B<'*>15010101(21.1％)，B<'*>151101(9.1％)，B<'*>1518(7.O％)，B<'*>1525(6.1％)，這五種等位基因占B<'*>15等位基因家族的85％。在B<'*>15等位基因家族中，表達B75抗原的等位基因HLA-B<'*>1502和B<'*>151101共占46.5％，但表達B62抗原的HLA-B<'*>15等位基因多態(tài)性最強，共檢出7種等位基因。此外，本研

8、究發(fā)現(xiàn)1例未知等位基因，該基因序列與所有已知的HLA-B<'*>15或B<'*>46等位基因序列均不相同，在外顯子3的116位處存在一個點突變G->A。(2)分別檢出A-B<'*>15、B<'*>15-DRBl兩座位單倍型28種和40種。檢出A-B<'*>15-DRBl三座位單倍型52種，最常見的五個三座位單倍型為： A<'*>11-B<'*>1502-DRB 1<'*>12(1.21％)，A<'*>11-B<'*>1 502-DRB

9、1<'*>15(0.77％)，A<'*>11-B<'*>15010101-DRB 1<'*>04(0.77％)，A<'*>02-B<'*>1502-DRB1<'*>12(0.32％)，A<'*>02-B<'*>151101-DRB1<'*>09(0.31％)。 結(jié)論:研究表明在四川籍漢族人群中HLA-B<'*>15等位基因水平表現(xiàn)出豐富的多態(tài)性和特有的分布特征，這提示對B<'*>15陽性患者進行造血干細胞無關供者尋找時，需要進行