1、肌內(nèi)脂肪含量是影響豬肉品質(zhì)的重要因素。而育種過程中對(duì)高瘦肉率的長(zhǎng)期選擇，導(dǎo)致了肌內(nèi)脂肪含量以及豬肉品質(zhì)的下降。因此，提高肌內(nèi)脂肪含量，同時(shí)不影響其它部位脂肪的沉積，特別是皮下脂肪，成為豬育種的一個(gè)重要目標(biāo)。由于不同部位的脂肪在脂肪代謝與脂肪細(xì)胞分化能力上存在著差異，這為尋找調(diào)控脂肪在不同組織差異沉積的分子機(jī)理提供了可能性。為了解肌內(nèi)脂肪與皮下脂肪差異沉積的機(jī)制，比較了源于皮下脂肪與肌內(nèi)脂肪的前體脂肪細(xì)胞的分化能力，并對(duì)脂肪分化與沉積起關(guān)

2、鍵調(diào)控作用的PPARγ基因在兩種細(xì)胞中的表達(dá)量進(jìn)行了檢測(cè)。隨后預(yù)測(cè)了靶向PPARγ的miRNA，并對(duì)其在兩種細(xì)胞中的表達(dá)量進(jìn)行了比較，最后通過雙熒光報(bào)告系統(tǒng)對(duì)差異表達(dá)的miRNA進(jìn)行靶向性驗(yàn)證。
　　主要實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下:
　　1、在體外環(huán)境下，源于肌內(nèi)脂肪組織的前體脂肪細(xì)胞在分化能力上強(qiáng)于皮下脂肪組織來源的前體脂肪細(xì)胞。DMI誘導(dǎo)分化9天后，肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞脂質(zhì)積聚水平顯著高于皮下脂肪細(xì)胞(P＜0.05)。對(duì)兩種脂肪細(xì)胞中脂質(zhì)

3、代謝相關(guān)基因進(jìn)行比較，結(jié)果表明，脂肪合成關(guān)鍵基因乙酰-CoA羧化酶(Acetyl-CoA Carboxylase，ACC)、脂肪酸合成酶（Fatty Acid Synthase，F(xiàn)AS），以及脂肪降解相關(guān)基因脂肪甘油三酯脂酶（Adipose Triglyceride Lipase，ATGL）、激素敏感酯酶（Hormone Sensitive Lipase，HSL）在肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中的表達(dá)水平顯著高于其在皮下脂肪細(xì)胞中的表達(dá)水平(P＜0.0

4、5)。肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中脂肪細(xì)胞分化關(guān)鍵基因PPARγ的mRNA表達(dá)及蛋白表達(dá)水平均顯著高于其在皮下脂肪中的表達(dá)(P＜0.05)。
　　2、通過生物信息學(xué)預(yù)測(cè)獲得miR-130a、miR-130b、miR128、miR-301、miR-27a和miR-27b等6個(gè)靶向PPARγ的miRNA。定量分析結(jié)果表明，miR-27a與miR-27b在皮下脂肪細(xì)胞的表達(dá)量顯著高于肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中的表達(dá)量(P＜0.05)，而miR-130a、miR-

5、130b、miR128、miR-301的表達(dá)量在皮下脂肪細(xì)胞與肌內(nèi)脂肪細(xì)胞中沒有顯著差異(P＞0.05)。構(gòu)建含PPARγ3'-UTR序列的表達(dá)質(zhì)粒pGL3-Control/PPARγ，熒光素酶活性分析表明，miR-27b可以靶向調(diào)控PPARγ。
　　本研究表明，肌內(nèi)前體脂肪細(xì)胞比皮下前體脂肪細(xì)胞在體外具有更強(qiáng)的分化能力。miR-27b能夠靶向調(diào)控PPARγ，miR-27b在兩種脂肪細(xì)胞中表達(dá)的差異能夠?qū)е翽PARγ在兩種細(xì)胞中的