1、松材線蟲(Bursaphelenchus xylophilus)病是松樹上的一種毀滅性病害,具有危害性大、傳播速度快、防治難度大等特點,是世界性檢疫對象。前人對松材線蟲病的病源、敏病機理以及防治技術(shù)進行了大量的研究。自發(fā)現(xiàn)松材線蟲病起,國內(nèi)外投入了大量的人力、物力和財力來防治該病,但該病到目前為止還沒有得到有效控制,且仍有繼續(xù)蔓延的趨勢。 本研究在前人研究的基礎(chǔ)上就松材線蟲簡便有效人工飼養(yǎng)方法的建立和利用RNA干擾技術(shù)抑制松材線

2、蟲的繁殖進行了初步研究,結(jié)果表明： 1.50條松材線蟲在培養(yǎng)9天后就進入了大量繁殖的指數(shù)生長期,培養(yǎng)10天松材線蟲的數(shù)量可擴大300倍,培養(yǎng)15天數(shù)量可擴大數(shù)千倍。 2.在傳統(tǒng)形態(tài)分類上,松材線蟲和擬松材線蟲主要依靠雌成蟲的尾部特征來區(qū)分,幼蟲則較難鑒定。本實驗根掘兩者在ITS-1區(qū)的細小差別設(shè)計了引物,PCR反應(yīng)后電泳,用SF+R引物能出現(xiàn)約340bp長度目的條帶的就是松材線蟲,而用NF+R引物有目的條帶的為擬松材線蟲

3、,這樣就可以準確地區(qū)分兩個形態(tài)特征很相似的近緣種。 3.松材線蟲的單異活體培養(yǎng)不但操作簡單,而且產(chǎn)量比較高。采用PDA平板培養(yǎng)狄葡萄孢,待狄葡萄孢鋪滿平板后接種松材線蟲,25℃恒溫培養(yǎng)15天,然后漏斗收集是簡便有效的松材線蟲人工飼養(yǎng)方法。 4.利用不同物種間關(guān)鍵基因的高度保守性,從秀麗隱桿線蟲RNA聚合酶基因出發(fā)克降了松材線蟲RNA聚合酶基因片段,同時選用了帶雙啟動子的載體LITUMS38i,成功構(gòu)建了能表達雙鏈目的片段