丙泊酚對大鼠神經(jīng)干細胞增殖和遷移的調(diào)控.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  觀察丙泊酚對懷孕15天(E15)大鼠大腦皮層神經(jīng)干細胞(NSCs)增殖和遷移的影響并探討問題其可能機制。
  方法:
  1、分離E15天SD大鼠大腦皮層進行神經(jīng)干細胞原代培養(yǎng)。以(1-2)*106/ml細胞密度接種,在含有2% B27,20ng/ml bFGF,20ng/ml EGF的DMEM/F12的培養(yǎng)基中培養(yǎng),并穩(wěn)定傳至第三代。用Nestin細胞免疫化學染色法鑒定神經(jīng)干細胞,Nestin陽性率大于9

2、5%,表示傳至第三代的細胞仍為神經(jīng)干細胞。
  2、將原代培養(yǎng)至第三代的神經(jīng)干細胞隨機分為4組:空白組,終濃度為0.1%的DMSO組,丙泊酚終濃度為20與50uM組,放入培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)12h。
  3、取分組的神經(jīng)干細胞,經(jīng)藥物處理培養(yǎng)2小時后,加入終濃度為10μ M的Edu,繼續(xù)培養(yǎng)4小時后進行Edu免疫熒光染色,用Edu的陽性率檢測神經(jīng)干細胞的增殖能力。
  4、取分組的神經(jīng)干細胞,經(jīng)藥物處理培養(yǎng)6小時后,收集神

3、經(jīng)干細胞按照Tirzal試劑的說明書提取各組細胞的總RNA,再將其逆轉(zhuǎn)錄為cDNA后,采用熒光實時定量聚合酶鏈反應(yīng)法(Real-Time PCR)檢測各組樣本中Stat3、Sox2和Notch1 mRNA的含量。
  5、取分組的神經(jīng)干細胞,經(jīng)藥物處理培養(yǎng)6小時后,收集各組神經(jīng)干細胞并提取總蛋白,采用Western blotting法檢測Stat3及p-Stat3蛋白含量的表達;
  6、取分組的神經(jīng)干細胞,經(jīng)藥物處理培養(yǎng)6

4、小時后,將神經(jīng)干細胞接種到Transwell板中,用遷移至小板下室的細胞數(shù)量表示神經(jīng)干細胞的遷移能力。
  結(jié)果:
  1、與空白組相比,Edu免疫熒光染色檢測結(jié)果表明,丙泊酚組促進了神經(jīng)干細胞增殖能力(P<0.05);
  2、與空白組相比,qPCR檢測結(jié)果發(fā)現(xiàn),丙泊酚組Stat3與Sox2 mRNA的含量上升顯著(P<0.05);
  3、與空白組相比,Western blotting檢測結(jié)果表明,丙泊酚組p

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