1、研究背景和目的：
　　 胃腫瘤是我國常見的惡性腫瘤之一，總體五年生存率不到30％。目前的治療方法，包括根治性手術(shù)切除、化療、放療及其他綜合治療等，均未能有效提高腫瘤病人的治愈率和生存率，且大多數(shù)病人預(yù)后很差。胃癌經(jīng)常在晚期才被診斷，約有40％到50％患者診斷時已經(jīng)是局部晚期。大蒜素為百合科植物大蒜鱗莖中提取的特有的含硫化合物，化學名稱為二烯丙基三硫(Diallyl trisulfide，DATS)，傳統(tǒng)上大蒜素被用于抗細菌、病毒

2、和真菌的感染。近年來，國內(nèi)外實驗研究表明，DATS對多種腫瘤細胞均有明顯抑制作用，而且這種抑制作用對機體幾乎沒有毒副作用。本實驗通過觀察DATS對分化程度不同的人胃腫瘤細胞增殖、凋亡的影響，以及對凋亡過程中Caspase-3和Caspase-8的活性的影響，初步研究大蒜素誘導人胃腫瘤細胞凋亡的途徑；通過建立人胃腫瘤裸鼠皮下移植瘤模型，從整體水平上研究DATS對抗人胃腫瘤細胞BGC-823裸鼠移植瘤的作用機制。
　　 研究方法：<

3、br>　　 以MTT法檢測不同濃度的大蒜素對胃腫瘤細胞生長的影響，評價其對細胞的作用性質(zhì)；采用細胞化學染色法和Hoechst33342染色法觀察DATS誘導胃腫瘤細胞凋亡的形態(tài)，明確大蒜素誘導胃腫瘤細胞凋亡的最佳濃度和時間；以AnnexinV-FITC/PI雙染法，流式細胞儀檢測DATS誘導胃腫瘤細胞的凋亡率；使用Caspases活性檢測試劑盒，比色法測定Caspase-3和Caspase-8活性的變化，評價DATS對Caspases

4、酶活性的影響。
　　 培養(yǎng)人胃腺癌細胞BGC-823，細胞活力和數(shù)量符合接種要求時，接種至裸鼠右前肢腋部皮下，建立裸鼠人胃癌移植瘤模型；隨機分為模型組，DATS大、小劑量組(20、5mg/kg)；觀察裸鼠一般生存情況：監(jiān)測裸鼠體重的變化，同時觀察裸鼠攝食、攝水和精神狀態(tài)等變化；測量裸鼠移植瘤的短徑、長徑，計算瘤體體積，繪制腫瘤生長曲線；處死裸鼠后，測量移植瘤質(zhì)量，計算腫瘤抑制率；觀察瘤組織，取小塊組織常規(guī)石蠟包埋切片，HE染色；

5、使用Caspases活性檢測試劑盒，比色法測定移植瘤組織中Caspase-3和Caspase-8活性的變化。
　　 結(jié)果：
　　 DATS對胃腫瘤細胞BGC-823、SGC-7901、MGC80-3、MKN-28增殖具有明顯的抑制作用，24d，時IC50分別為130．56μmol/L、143．45μmol/L、137．89μmol/L、168．49μmol/L；48小時IC50分別為96．25μmol/L、92．31μm

6、ol/L、100．63μmol/L、143．56μmol/L；72小時IC50分別為65．72μmol/L、83．16μmol/L、90．12μmol/L、156．23μmol/L。細胞化學染色觀察到DATS處理后的細胞體積皺縮、核濃縮、核邊集以及凋亡小體形成等凋亡形態(tài)學改變，對照組形態(tài)正常，核大小均一，貼壁良好。Hoechest33342熒光染色觀察可見核濃縮，致密的強熒光團塊、凋亡小體等形態(tài)學變化，對照組則發(fā)微弱藍光。60μmol/

7、L的DATS作用24小時后，胃腫瘤細胞BGC-823、SGC-7901、MKN-28的凋亡率分別為21．57％±0．83％，12．31％±0．45％，10．97％±0．54％，均高于對照組3．48％±0．28％，6．75％±0．36％，4．59％±0．31％，P<0．05；比色法檢測Caspases酶活性提示，DATS能活化胃腫瘤細胞BGC-823、SGC-7901、MKN-28中的Caspase-3的活性，活化BGC-823細胞中Ca

8、spase-8的活性。
　　 DATS具有抑制人胃腫瘤細胞BGC-823細胞裸鼠皮下移植瘤生長的作用。至實驗結(jié)束時，DATS大、小劑量組裸鼠移植瘤平均體積分別為1013．90±402．65mm3和1203．55±269．35 mm3與模型組2026．36±407．36mm3比較，差異均具有統(tǒng)計學意義，P<0．05。裸鼠體重沒有發(fā)生顯著性改變，在DATS劑量為5mg/kg和20 mg/kg時，其抑制率分別為12％和38％，對裸鼠的

9、生存狀態(tài)幾乎沒有影響。DATS大、小劑量組裸鼠移植瘤組織的Caspase-3和Caspase-8的活性均高于模型組。
　　 結(jié)論：
　　 DATS可以抑制人胃腫瘤細胞BGC-823、SGC-7901、MGC80-3、MKN-28增殖；當DATS的濃度為60μmol/L時，可以明顯誘導胃腫瘤BGC-823、SGC-7901、MKN-28細胞凋亡；DATS可能通過使BGC-823細胞內(nèi)Caspase-8的活性增加，從而直接活