1、目的:大蒜素(Allicin)為百合科植物大蒜鱗莖中提取的特有的含硫化合物，傳統(tǒng)上大蒜素被用于抗細菌、病毒和真菌的感染。近年來，國內(nèi)外實驗研究表明，大蒜素對多種腫瘤細胞均有明顯抑制作用。而且，這種抑制作用對機體幾乎沒有毒副作用。前期研究表明大蒜素可誘導人肝癌細胞凋亡，但對其誘導凋亡的機制尚不清楚。為探索大蒜素的抗癌機制，我們采用大蒜素在體外作用于人肝癌細胞HepG-2，通過不同層面的凋亡檢測技術(shù)，從細胞分子水平觀察研究大蒜素誘導人肝癌細

2、胞的凋亡作用、對線粒體膜電位及細胞色素c的影響，探討大蒜素的抗癌機制，從而為大蒜素治療肝癌提供更充足的理論依據(jù)。方法:取對數(shù)生長期的人肝癌細胞HepG2，經(jīng)大蒜素分別處理(大蒜素終濃度分別為20,40，60μg/ml)，檢查時間點分別為(4h,8h,6h)后，用四甲基偶氮哇藍(MTT)比色還原法計算大蒜素對肝癌HepG2細胞生長的抑制率。取對數(shù)生長期的人肝癌細胞HepG2，經(jīng)不同濃度大蒜素(終濃度為20,40，60μg/ml)作用8小時

3、后，采用相差倒置顯微鏡、常規(guī)HE染色、Hoeches33258熒光染色觀察細胞形態(tài)學的變化，DNA凝膠電泳分析誘導凋亡的產(chǎn)生。取對數(shù)生長期的人肝癌細胞HepG，經(jīng)大蒜素濃度為40μg/ml作用4小時后用熒光染料JC-1檢測細胞線粒體跨膜電位的變化，同時用免疫組化法檢測大蒜素對細胞中細胞色素C的影響。結(jié)果:大蒜素能明顯抑制HepG2細胞的增殖，除大蒜素組(大蒜素濃度20 mg/L組)作用4h和8h抑制率與陰性對照組抑制率比較無顯著差異(P

4、>0.05)外，其它不同濃度、時間點間的大蒜素組抑制率與陰性對照組比較均有統(tǒng)計學意義(P<0.01)，且呈濃度、時間依賴性，抑制率隨濃度增加、作用時間延長而升高。不同濃度大蒜素作用肝癌細胞8小時后，倒置相差顯微鏡觀察到不同程度的細胞體積縮小，細胞之間連接減少，細胞皺縮，折光度上升，邊緣不規(guī)則等凋亡形態(tài)學改變，而對照組細胞輪廓清晰，核呈圓形或橢圓形，細胞質(zhì)飽滿，核膜輪廓明顯，相鄰細胞生長融合成片。HE染色觀察到不同程度的細胞體積皺縮、核濃

5、縮、核邊集以及凋亡小體形成等凋亡形態(tài)學改變，陰性對照組形態(tài)正常，核大小均一，貼壁良好。Hoechest熒光染色觀察可見核濃縮，致密的強熒光團塊、凋亡小體等形態(tài)學變化，呈一定量效關(guān)系，陰性對照組則發(fā)微弱藍熒光；DNA凝膠電泳可見大蒜素濃度組(40、60mg/L)有典型的梯狀條帶(DNA Ladder)出現(xiàn)。大蒜素40mg/L處理HepG2細胞4小時后，應用熒光染色來檢測對照組細胞和大蒜素組細胞中的線粒體跨膜電位的變化，觀察到大蒜素處理后的

6、凋亡細胞呈現(xiàn)亮綠色熒光，而對照組細胞呈現(xiàn)均勻黃綠色熒光，說明有線粒體膜電位的改變。同時應用免疫化學方法檢測結(jié)果顯示，對照組細胞的胞漿中幾乎無棕黃色顆粒表達很少，而經(jīng)40mg/L濃度大蒜素處理4小時后的細胞，可見胞質(zhì)中呈棕黃色顆粒的陽性細胞，經(jīng)統(tǒng)計學分析，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.01)結(jié)論:①大蒜素對人肝癌細胞株HepG2有明顯的生長抑制作用，除大蒜素濃度20mg/L組作用4h和8h抑制率與陰性對照組抑制率比較無顯著差異(P>0.05)