1、昆蟲是自然界中數(shù)量較多的物種，這歸功于它們生存和生殖過程中一個(gè)重要的生理功能—嗅覺系統(tǒng)。昆蟲的嗅覺系統(tǒng)經(jīng)過長期進(jìn)化變得高度靈敏，它們用此來感受自然環(huán)境中的各種化學(xué)信息繼而產(chǎn)生相應(yīng)的生理和行為反應(yīng)，如尋找配偶、食物源和寄主、產(chǎn)卵等行為。棉鈴蟲Helicoverpa armigera是棉花蕾鈴期的重要鉆蛀性害蟲，主要蛀食蕾、花、鈴，也取食嫩葉。隨著各種作物的復(fù)種指數(shù)不斷提高，為棉鈴蟲的發(fā)生提供了豐富的食料和有利的繁殖場所，加上昆蟲抗藥性的增

2、強(qiáng)，導(dǎo)致棉鈴蟲的危害有逐年加重的趨勢(shì)。因此，尋找新的技術(shù)手段成為綜合防治棉鈴蟲的首要問題，很多學(xué)者已經(jīng)將棉鈴蟲嗅覺作為研究的重點(diǎn)。本研究利用PCR結(jié)合RACE技術(shù)克隆三條普通氣味受體基因的cDNA全長;利用不同的生物信息學(xué)軟件對(duì)序列進(jìn)行結(jié)構(gòu)預(yù)測、序列比對(duì)和進(jìn)化樹分析;利用半定量RT-PCR檢測其在成蟲不同組織中的表達(dá);利用雙極電壓鉗和觸角電位反應(yīng)對(duì)其功能進(jìn)行了初步探究。
　　1.克隆氣味受體的cDNA全長、序列分析、組織表達(dá)分析<

3、br>　　從棉鈴蟲觸角中克隆得到三條氣味受體基因HarmOR9、HarmOR10與HarmOR29的cDNA全長。序列分析顯示，HarmOR9全長1206 bp，編碼401個(gè)氨基酸;HarmOR10全長1173 bp，編碼390個(gè)氨基酸;HarmOR29全長1188 bp，編碼395個(gè)氨基酸。選擇已報(bào)道的鱗翅目昆蟲煙青蟲、家蠶、煙芽夜蛾和棉鈴蟲的氣味受體與本實(shí)驗(yàn)克隆得到的三個(gè)氣味受體進(jìn)行序列比對(duì)和進(jìn)化樹分析，結(jié)果顯示這三個(gè)氣味受體基因與

4、性信息素受體區(qū)別明顯，并與其它的普通氣味受體聚類在一起。半定量RT-PCR結(jié)果顯示，HarmOR9、HarmOR10和HarmOR29均在雌雄成蟲觸角高表達(dá)。HarmOR10在雄蟲觸角中高表達(dá)于雌蟲，而HarmOR9和HarmOR29在雌雄蟲觸角中無表達(dá)差異。另外，HarmOR9在雄蟲下唇須中也有微量表達(dá)，在其他組織均不表達(dá);HarmOR10在雌蟲生殖器中的表達(dá)也較明顯，在其他組織均不表達(dá);HarmOR29在其他組織均不表達(dá)。
　

5、　2.確定氣味受體的特異性配體
　　在爪蟾卵母細(xì)胞結(jié)合雙電極電壓鉗的實(shí)驗(yàn)中，通過對(duì)59種氣味進(jìn)行實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)苯甲醛為受體基因HarmOR10的特異性配體;在濃度梯度記錄中發(fā)現(xiàn)，HarmOR10在苯甲醛濃度為0.001 mol/L時(shí)反應(yīng)最強(qiáng)烈，即對(duì)氣味的反應(yīng)達(dá)到飽和。實(shí)驗(yàn)中受體HarmOR9及HarmOR29未發(fā)現(xiàn)配體氣味。
　　3.棉鈴蟲成蟲觸角的EAG分析
　　在觸角電位反應(yīng)試驗(yàn)中，17種揮發(fā)物均可引起棉鈴蟲成蟲產(chǎn)生EA

6、G反應(yīng)。以相同地區(qū)的雌雄蟲為研究對(duì)象時(shí)，北京棉鈴蟲中除去個(gè)別的幾個(gè)氣味（如苯乙醛、肉豆蔻酸、十六（烷）酸乙酯、苯甲酸甲酯等）刺激的反應(yīng)是雌蟲強(qiáng)于雄蟲，其余大部分氣味刺激的結(jié)果是雄蟲反應(yīng)強(qiáng)于雌蟲;廊坊棉鈴蟲中雄蟲對(duì)所有氣味的反應(yīng)都強(qiáng)于雌蟲，且無明顯差異。以不同地區(qū)相同性別的棉鈴蟲為研究對(duì)象時(shí)，無論是雌蟲還是雄蟲在受到氣味刺激后，廊坊地區(qū)成蟲的反應(yīng)比北京地區(qū)成蟲的反應(yīng)顯著，且雄蟲的反應(yīng)比雌蟲的反應(yīng)更靈敏一些。HarmOR10半定量的結(jié)果顯示