1、目的:
　　Toll樣受體活化MAPK信號途徑誘導的炎癥反應參與心血管疾病的發(fā)生發(fā)展，MKP-1負向調節(jié) MAPK信號傳導抑制炎癥反應。本研究通過分析活化TLR2誘導MKP-1表達及其信號傳導途徑，闡明脂蛋白肽活化TLR2誘導可控炎癥反應的分子機制，為臨床干預心血管疾病的發(fā)生發(fā)展提供線索和依據(jù)。
　　方法:
　　利用DMEM和RPMI1640常規(guī)方法分別培養(yǎng)人臍靜脈內皮細胞（HUVEC）和人單核細胞（THP-1）至穩(wěn)定

2、對數(shù)生長期，進行干預實驗。Pam3CSK4的劑量相關性分析濃度為0、0.01、0.05、0.1、0.5、1μg/ml，時間相關性分析的劑量為1μg/ml，處理時間為0、1、3、6、12、24小時。細胞干預以后mRNA表達水平檢測采用RT-PCR方法，蛋白質表達水平檢測采用western blot方法。信號傳導抑制劑的濃度為10μM；信號傳導分子的磷酸性蛋白水平檢測采用Western blot方法。對結果進行灰度掃描半定量分析，所用統(tǒng)計學

3、方法使用t檢驗，P值<0.05視為具有統(tǒng)計學意義。
　　結果:
　　1.不同濃度Pam3CSK4處理HUVCE細胞1小時，RT-PCR檢測結果顯示TLR2的mRNA表達水平上調，具有劑量依賴性；
　　2.1μg/ml Pam3CSK4處理HUVEC細胞1-24小時，RT-PCR檢測結果顯示TLR2的mRNA表達水平上調，具有時間依賴性；
　　3.不同濃度Pam3CSK4處理HUVCE細胞1小時，RT-PCR檢測結

4、果顯示促炎細胞因子TNF-α、IL-6和Cox-2的mRNA表達水平上調，具有劑量依賴性；
　　4.1μg/ml Pam3CSK4處理HUVEC細胞1-24小時，RT-PCR檢測結果顯示促炎細胞因子IL-6、TNF-α、MCP-1和Cox-2的mRNA表達水平上調，具有時間依賴性；
　　5.不同濃度Pam3CSK4處理HUVCE細胞1小時，RT-PCR檢測結果顯示MKP-1的mRNA表達水平上調，Western blot檢測

5、結果顯示MKP-1的蛋白質表達水平的上調，兩者上調均具有劑量依賴性；
　　6.1μg/ml Pam3CSK4處理HUVEC細胞1-24小時，RT-PCR檢測結果顯示MKP-1的mRNA表達水平上調，Western blot檢測結果顯示MKP-1的蛋白質表達水平的上調，兩者上調具有時間依賴性；
　　7.不同濃度Pam3CSK4處理HUVCE細胞0.5小時，Western blot檢測結果顯示ERK、JNK、P38的磷酸性蛋白表

6、達水平上調，具有劑量依賴性；
　　8.不同濃度Pam3CSK4處理HUVCE細胞0.5小時，Western blot檢測結果顯示NF-κB抑制蛋白IκB-α的蛋白表達水平下調，具有劑量依賴性；
　　9.10μM的U0126、SP600125、SB203580、和Bay117082處理HUVEC細胞30分種，然后再加入1μg/ml的Pam3CSK4刺激細胞1小時，RT-PCR檢測結果顯示U0126、SB203580和Bay11

7、7082都明顯下調Pam3CSK4誘導的MKP-1表達；
　　10.不同濃度的SB203580作用于 HUVEC細胞30分鐘，再用1μg/ml的Pam3CSK4刺激細胞1小時，RT-PCR結果顯示隨著抑制劑SB203580的濃度增加，MKP-1的表達逐步下降，具有明顯的劑量相關性。
　　結論：:
　　1.血管內皮細胞HUVEC細胞表達TLR2；
　　2.合成細菌脂肽Pam3CSK4活化TLR2誘導促炎細胞因子表達