1、SOX2作為一種重要的轉(zhuǎn)錄因子,已經(jīng)在脊椎動物中被確定參與胚胎發(fā)生、神經(jīng)發(fā)生、晶狀體發(fā)育以及誘導(dǎo)多能性胚胎干細胞形成中發(fā)揮重要的功能。本研究以重要的雙殼類海洋經(jīng)濟物種——櫛孔扇貝(Chlamys farreri)作為研究對象,通過RACE技術(shù)克隆獲得了sox2的cDNA全長序列,并采用半定量RT-PCR、實時熒光定量 PCR和原位雜交技術(shù)對其在櫛孔扇貝早期發(fā)育的表達特征、各組織中的空間表達以及成體各發(fā)育時期性腺的表達定位進行了分析,以期

2、為深入探討該基因在扇貝中的作用提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。主要結(jié)果如下:
　　櫛孔扇貝sox2(Cf-sox2)的cDNA全長序列為2194 bp,包含一個編碼327個氨基酸的開放閱讀框,并具有SOX家族保守的HMG-box以及SOXB1亞族的SOXp motif結(jié)構(gòu)。進一步發(fā)現(xiàn)櫛孔扇貝SOX2中不存在脊椎動物SOX2中的兩個末端結(jié)構(gòu),即在N末端不含有多聚甘氨酸結(jié)構(gòu),在C末端不具有富含絲氨酸的結(jié)構(gòu)。
　　實時熒光定量RT-PCR結(jié)果顯示,

3、Cf-sox2是母源性基因;其表達量在卵裂期胚胎中較受精卵顯著升高,囊胚中達到最高;原腸胚之后,表達量顯著下降,并在殼頂幼蟲降到最低。整體原位雜交結(jié)果顯示,陽性信號在原腸胚之前呈彌散分布;進入幼蟲時期后,陽性信號開始集中,擔(dān)輪幼蟲中主要集中在蟲體中部,靠近頂鞭毛的基部以及靠近殼腺原基細胞周圍;D形幼蟲則集中在內(nèi)臟團處;殼頂幼蟲信號的強度減弱,并且僅在疑似臟神經(jīng)節(jié)和足神經(jīng)節(jié)處有可見的陽性信號。這個表達圖式與哺乳動物類似,推測該基因可能參與

4、櫛孔扇貝胚胎和幼蟲組織器官的形成。
　　Cf-sox2 mRNA在增殖期和生長期成體組織中的半定量RT-PCR檢測結(jié)果顯示,其在精巢、卵巢和閉殼肌中均有表達,其次在生長期的外套膜和鰓中也檢測到一定水平的表達;腎和肝胰腺中沒有可見的表達。
　　對櫛孔扇貝成體精巢和卵巢各發(fā)育時期的Cf-sox2定位檢測發(fā)現(xiàn),其在各時期的所有類型的生殖細胞和濾泡細胞中均有表達,但信號強度在細胞之間存在差異,推測該基因可能參與成體組織的功能維持和配