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1、黑林1號(Populus simonii×Populus nigra)×Populus15 ACL是以小黑楊為母本,波蘭15A為父本,人工雜交選育的優(yōu)良無性系,其根系發(fā)達,生長迅速,抗旱、耐寒。7年生材積生長量平均比小黑楊大42%。該品系可用于營造農(nóng)田、防護林、用材林。
本論文以MS+0.3mg/L6-BA+0.07mg/L NAA為分化培養(yǎng)基、WPM+0.4mg/L IBA為生根培養(yǎng)基,以外源幾丁質(zhì)酶基因為目的基因,在此基礎(chǔ)
2、上進行黑林1號的組培體系建立及遺傳轉(zhuǎn)化研究,通過葉片及組培苗莖段的敏感性試驗,最終確定葉片分化時卡那霉素的臨界濃度為20mgL,芽誘導生根時卡那霉素的臨界濃度為10mg/L,抑菌抗生素頭孢塞肟鈉500mg/L的濃度不會對黑林1號葉片分化及生根培養(yǎng)產(chǎn)生不利影響。成功摸索出農(nóng)桿菌介導的黑林楊遺傳轉(zhuǎn)化體系:選取生長20d左右的幼嫩黑林楊組培苗葉片,通過主葉脈剪2~3下,預培養(yǎng)2~3d;將培養(yǎng)至對數(shù)生長期的農(nóng)桿菌(OD600=0.5~0.7)離
3、心后用液體MS培養(yǎng)基或無菌蒸餾水稀釋成OD600=0.3~0.4濃度進行浸染;侵染時間為6~10min;共培養(yǎng)2~3d后,轉(zhuǎn)入到篩選培養(yǎng)基中進行誘導不定芽的產(chǎn)生(含有20mg/L卡那霉素和500mg/L的頭孢塞肟鈉),以及生根階段的卡那霉素連續(xù)篩選(含有10mg/L卡那霉素和500mg/L的頭孢塞肟鈉)。通過農(nóng)桿菌介導法將外源幾丁質(zhì)酶基因?qū)氲胶诹?號楊基因組中,為黑林1號的遺傳轉(zhuǎn)化及抗性育種提供了理論基礎(chǔ)。
PCR分子檢測經(jīng)
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