1、本研究旨在體外分離培養(yǎng)兔胚胎干細(xì)胞，初步研究兔胚胎干細(xì)胞對(duì)軟組織創(chuàng)面是否具有促愈作用，為兔胚胎干細(xì)胞在創(chuàng)傷修復(fù)中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ);探討兔胚胎干細(xì)胞分泌物在體外對(duì)動(dòng)物機(jī)體創(chuàng)面的愈合作用;探討兔胚胎干細(xì)胞分泌物在不同種屬之間是否存在特異性以及對(duì)待不同的創(chuàng)傷是否有促進(jìn)愈合的作用，為兔胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液在創(chuàng)傷修復(fù)中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。試驗(yàn)方法、結(jié)果和結(jié)論如下:
　　1.兔胚胎干細(xì)胞的分離、傳代
　　選擇自然發(fā)情母兔與公兔自然交配，配

2、種后90h手術(shù)沖胚。對(duì)原代培養(yǎng)采取酶消化法，對(duì)細(xì)胞形態(tài)及變化進(jìn)行觀察，取生長(zhǎng)良好的兔胚胎干細(xì)胞接種在飼養(yǎng)層上，在38℃、5％CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。
　　2.兔胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液的提取
　　當(dāng)ES細(xì)胞傳代穩(wěn)定，開(kāi)始使用胰酶消化傳代法，即:吸去培養(yǎng)液。此時(shí)把吸去的培養(yǎng)液收集起來(lái)裝入到離心管里進(jìn)行離心:4000rpm*5分鐘抽取上清液。將上清液-20℃凍起來(lái)
　　3.構(gòu)建日本大耳白兔組織缺損創(chuàng)面模型
　　4.構(gòu)建日本大

3、耳白兔眼部組織創(chuàng)傷模型
　　5.構(gòu)建日本大耳白兔燒傷模型
　　6.構(gòu)建大鼠軟組織缺損創(chuàng)面模型
　　通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到如下結(jié)果:
　　1、在日本大耳白兔組織缺損創(chuàng)面模型中，注射兔胚胎干細(xì)胞的右側(cè)傷口和沒(méi)有注射兔胚胎干細(xì)胞的左側(cè)傷口比較，右側(cè)的傷口愈合速度要快。注射兔胚胎干細(xì)胞的右側(cè)傷口愈合速度和注射兔胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液的左側(cè)傷口比較，兩者愈合速度沒(méi)有明顯的區(qū)別。
　　2、在日本大耳白兔眼部組織創(chuàng)面模型中，滴注兔胚胎干

4、細(xì)胞培養(yǎng)液的右側(cè)眼睛和沒(méi)有滴注兔胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液的左側(cè)眼睛比較，右側(cè)眼睛的炎癥反應(yīng)消退的快。
　　3、在日本大耳白兔燒傷模型中，注射兔胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液的右側(cè)傷口和沒(méi)有注射兔胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液的左側(cè)相比較，右側(cè)的傷口愈合速度要快。
　　4、在構(gòu)建大鼠軟組織缺損創(chuàng)面中，注射兔胚胎于細(xì)胞培養(yǎng)液的右側(cè)傷口和沒(méi)有注射兔胚胎干細(xì)胞培養(yǎng)液的左側(cè)傷口比較，右側(cè)的傷口愈合速度要快且沒(méi)有出現(xiàn)排斥反應(yīng)。
　　通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到的結(jié)論
　　挑破