1、雞傳染性法氏囊病(Infectious bursal disease，IBD)是由傳染性法氏囊病病毒(Infectious bursal disease virus，IBDV)引起的一種急性、高度接觸性傳染病。IBDV主要侵害雛雞的中樞免疫器官法氏囊，不但會使感染雞致病死亡，生產(chǎn)性能下降，而且還可致雛雞免疫抑制，導(dǎo)致雞群對新城疫、馬立克病及傳染性支氣管炎等多種重要疫病的免疫失敗，引起了世界禽病工作者的高度重視，是目前危害世界養(yǎng)禽業(yè)的主要

2、傳染病之一。尤其是20世紀(jì)80年代中期以后出現(xiàn)的超強毒株(vvIBDV)，能使感染雞的死亡率達(dá)到60％以上，給世界養(yǎng)禽業(yè)帶來了嚴(yán)重的經(jīng)濟(jì)損失。 1957年該病首次在美國特拉華州的甘布羅鎮(zhèn)(Gumboro)的肉雞群中發(fā)生。最初分離到的病毒發(fā)病率高，但致死率通常在2％～5％，偶爾達(dá)20％～30％，這種病毒株稱之為標(biāo)準(zhǔn)毒IBDV(vIBDV)。20世紀(jì)80年代后期，美國出現(xiàn)了與標(biāo)準(zhǔn)毒在抗原性上有明顯差異的變異株。歐洲國家首先報道了致死

3、率高達(dá)90～100％的超強毒(vvIBDV)，90年代初傳至中國及亞洲其他地區(qū)。vvIBDV感染現(xiàn)己遍布于全球主要養(yǎng)禽地區(qū)，在工業(yè)化養(yǎng)雞業(yè)發(fā)達(dá)的國家尤為嚴(yán)重。 IBDV是雙鏈RNA病毒，屬于雙RNA病毒科(Biranviridae)禽雙RNA病毒屬(Avibirnavirus)，無囊膜，呈二十面體對稱，病毒粒子直徑60nm。其基因組由A、B兩個節(jié)段組成。B節(jié)段(約218kb)編碼VP1蛋白，為RNA依賴的RNA聚合酶。A節(jié)段(約

4、313kb)具有兩個相互重疊的開放閱讀框(ORE)，下游的ORF1編碼的前體蛋白VP2/VP4/VP3可進(jìn)一步剪切加工為VP2、VP4及VP3。其中VP2是病毒的主要宿主保護(hù)性抗原，與病毒的抗原變異和毒力相關(guān)；VP4為一種絲氨酸蛋白酶，負(fù)責(zé)前體蛋白VP2/VP4/VP3的自我剪切；VP3是病毒的結(jié)構(gòu)蛋白之一，具有群特異性抗原。上游的ORF2(438bp)編碼非結(jié)構(gòu)蛋白VP5(約15ku)，該蛋白非病毒復(fù)制所必需，與病毒致病性有關(guān)。IBD

5、V不同毒株氨基酸的差異主要發(fā)生于VP2區(qū)特別是206至305個氨基酸，稱之為VP2高變區(qū)，是抗原性的主要部位。這段區(qū)域內(nèi)不同毒株間的變異很大，其分子結(jié)構(gòu)的改變常導(dǎo)致病毒致病力的改變及宿主對疫苗應(yīng)答的改變，使得傳統(tǒng)的疫苗不能控制其流行。在VP2基因高變區(qū)內(nèi)包括2個親水區(qū)和1個七肽區(qū)。親水區(qū)是變異發(fā)生的熱點部位，對于超強毒株抗原性極為重要。 本研究區(qū)分了IBDV超強毒株和強毒、疫苗株，并在大腸桿菌中表達(dá)了IBDV的VP2基因，獲得了

6、以下結(jié)果： 1．RT-PCR輔助限制性內(nèi)切酶方法鑒別IBDV超強毒株、強毒株及疫苗株首先根據(jù)GenBank上IBDV VP2基因組的保守序列設(shè)計一對引物，利用RT-PCR擴(kuò)增出大小為802bp的PCR產(chǎn)物。對比分析了IBDV超強毒株、強毒株及疫苗株基因組PCR產(chǎn)物的酶切位點，選出Aha I、Stu I和BamH I、Nsp I兩組限制性內(nèi)切酶。分別對超強毒株、強毒株及疫苗株進(jìn)行酶切，以區(qū)分超強毒株、強毒株及疫苗株。結(jié)果表明，超強

7、毒株能被Aha I、Stu I切出327bp的片段，而強毒株及疫苗株則只能被．BamH I、NspI切出270bp的片段。這種方法能夠準(zhǔn)確、快速地檢測出發(fā)病是否由IBDV超強毒株引起，為IBD的診斷提供了一種新的手段。 2．IBDV VP2基因的原核表達(dá)根據(jù)IBDV陜西地區(qū)分離株的VP2基因的cDNA為模板，設(shè)計相應(yīng)引物進(jìn)行擴(kuò)增。得到的目的基因連接到pET-32α原核表達(dá)載體中，得到重組質(zhì)粒pET-VP2。經(jīng)過PCR、酶切及測序分析，確