雞傳染性法氏囊病病毒VP3基因的克隆與原核表達(dá).pdf_第1頁(yè)
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1、雞傳染性法氏囊病(IBD)是由雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)引起的雞的一種高度接觸性傳染病，由于其在亞臨床感染中的免疫抑制作用和在急性感染中的高死亡率，傳染性法氏囊病是養(yǎng)禽業(yè)的一個(gè)重要疾病。VP3是IBDV的主要結(jié)構(gòu)蛋白，具有群特異性的抗原決定簇，也是IBDV主要的免疫原性蛋白。 本研究利用RT-PCR技術(shù)，對(duì)從河北某雞場(chǎng)分離的IBDV分離株的VP3基因進(jìn)行了擴(kuò)增，并將PCR產(chǎn)物連接到克隆載體pMD18-TSimplevect

2、or，然后轉(zhuǎn)化大腸桿菌。酶切和PCR鑒定的結(jié)果表明所克隆的片斷大小為850bp左右。 將VP3基因克隆至原核表達(dá)載體pGEX-6P-1，經(jīng)酶切和PCR鑒定，證明成功構(gòu)建了重組表達(dá)載體pGEX-VP3。測(cè)序結(jié)果表明所克隆的片斷大小為843bp。將VP3基因序列通過(guò)比對(duì)分析，與IBDV國(guó)際標(biāo)準(zhǔn)株Cu-1菌株核酸序列的同源性為96％。 在IPTG的誘導(dǎo)下，將構(gòu)建好的融合表達(dá)載體在大腸桿菌中表達(dá)。融合蛋白GST-VP3的分子量約

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