1、本研究采用本實(shí)驗(yàn)室pIBV-S1質(zhì)粒(DQ288927)構(gòu)建自殺性DNA疫苗。通過(guò)PCR擴(kuò)增在S1基因兩端引入BamH I酶切位點(diǎn)，經(jīng)酶切插入自殺性DNA疫苗載體pSCA1，構(gòu)建了自殺性DNA疫苗pSCA1-S1質(zhì)粒，經(jīng)由菌落PCR、酶切及測(cè)序鑒定目的基因被成功克隆至自殺性DNA疫苗載體pSCA1，且方向正確。以1：20的配比加入脂質(zhì)體作佐劑，制備了IBV S1基因的自殺性DNA疫苗。 為證實(shí)所構(gòu)建自殺性DNA疫苗pSCA1-S

2、1質(zhì)粒的正確表達(dá)，分別取等量的重組質(zhì)粒pSCA1-S1、常規(guī)IBV S1基因DNA疫苗質(zhì)粒pcDNA-S1、空載體pSCAl轉(zhuǎn)染Vero細(xì)胞。48h后經(jīng)間接免疫熒光試驗(yàn)觀(guān)察發(fā)現(xiàn)，pSCA1-S1以及pcDNAS1轉(zhuǎn)染組細(xì)胞漿均可見(jiàn)特異性亮綠色熒光，pSCA1空載體組無(wú)熒光為陰性。證實(shí)自殺性DNA疫苗載體能成功表達(dá)S1基因。 為評(píng)價(jià)工BV自殺性DNA疫苗的免疫效果，分別用構(gòu)建的自殺性DNA疫苗pSCA1-S1、常規(guī)DNA疫苗pcD

3、NAS1、空載體pSCAl和IBV滅活疫苗、PBS液對(duì)照，免疫非免疫健康雛雞。自免疫后每周采血分離血清連續(xù)五周，采用間接ELISA試驗(yàn)檢測(cè)血清特異性抗體IgG，結(jié)果表明：自殺性DNA疫苗產(chǎn)生針對(duì)IBV的特異性血清抗體，免疫后第二周上升到峰值，隨后開(kāi)始下降，其抗體水平與常規(guī)IBV DNA疫苗差異不顯著(P>0.05)。用流式細(xì)胞儀(FACS)測(cè)定各組CD3<'+>、CD4<'+>、CD8<'+>動(dòng)態(tài)變化，結(jié)果顯示：自殺性DNA疫苗pSCA

4、1-S1組CD3<'+>水平在14d和28d差異顯著高于常規(guī)IBV DNA疫苗組(P<0.05)：CD4<'+>水平在21d、35 d差異顯著高于常規(guī)IBV DNA疫苗組(P<0.05)；CD8<'+>水平只在35d差異顯著高于常規(guī)IBV DNA疫苗組(P<0.05)。表明自殺性DNA疫苗能誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生高水平的細(xì)胞免疫。攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果表明：pSCA1-S1組攻毒相對(duì)保護(hù)率為60％；pcDNAS1組免疫雞只相對(duì)保護(hù)率低于pSCA1-S1