1、棉酚(Gossypol)不僅是棉屬植物體內(nèi)一種重要的抗性物質(zhì);也是醫(yī)藥上具有重要應用價值的天然物質(zhì)，具有重要的男性抗生育、抗腫瘤、抗病毒等作用。為了有效調(diào)控這一重要的次生代謝產(chǎn)物，人們長期致力于棉酚及其儲藏器官-色素腺體(Pigment gland)的研究。
　　從已構(gòu)建完成的棉花色素腺體形成時期的cDNA均一化文庫中篩選出一個棉花鋅結(jié)合蛋白(Zinc binding protein-ZnBP)基因的全長cDNA序列。經(jīng)過克隆，測

2、序及序列分析，發(fā)現(xiàn)該片段包含一個完整開放閱讀框，長654個堿基，編碼217個氨基酸，蛋白分子量大小為24.6kD，等電點為9.33。推導的氨基酸序列(EU372997.1)與擬南芥鋅結(jié)合蛋白(EFH46337.1)氨基酸序列同源性高達77％。以湘棉-18葉片基因組DNA為模板，通過聚合酶鏈式反應(PCR)擴增分離獲得棉花ZnBP基因的基因組序列。經(jīng)測序分析，得到1731bp的棉花gDNA片段，編碼區(qū)以ATG啟動子開始緊接著一個內(nèi)含子，其

3、中編碼區(qū)含有3個內(nèi)含子。以pET-28a(+)為原核表達載體，大腸桿菌BL21(DE3)為宿主表達菌，在37℃，IPTG終濃度1mmol/L，誘導時間8h，轉(zhuǎn)速150r/min條件下，實現(xiàn)最優(yōu)表達;并通過SDS-PAGE凝膠電泳及Western Blotting檢測分析表明蛋白表達正確。以pCAMBIA2300-35S-OCS為載體，構(gòu)建pCAMBIA2300-ZnBP超表達載體，并用凍融法轉(zhuǎn)化GV3101感受態(tài)農(nóng)桿菌。農(nóng)桿菌侵染法將Z