1、家蠶是鱗翅目的模式昆蟲(chóng)，具有重要的經(jīng)濟(jì)價(jià)值，其絲腺是一種高度特異化且能夠高效地合成絲蛋白的器官，研究表明絲蛋白基因的表達(dá)主要是在轉(zhuǎn)錄調(diào)控水平上進(jìn)行的，這是目前研究的熱點(diǎn)。鋅指蛋白是一類在真核細(xì)胞中普遍存在的與細(xì)胞內(nèi)核酸特異性結(jié)合的轉(zhuǎn)錄因子。本研究發(fā)現(xiàn)了在家蠶絲腺特異表達(dá)的并且含有C2H2型ZFP結(jié)構(gòu)域的轉(zhuǎn)錄因子—BmZFP16-like，采用克隆、表達(dá)、qRT-PCR、western blot等技術(shù)對(duì)其生物信息學(xué)特征、轉(zhuǎn)錄水平以及蛋白質(zhì)

2、水平的組織表達(dá)模式進(jìn)行了分析，探討了BmZFP16-like在家蠶絲素重鏈蛋白基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控中的作用。獲得的主要研究結(jié)果如下：
　　1、通過(guò)在GenBank中與其它鱗翅目昆蟲(chóng)鋅指蛋白保守序列比對(duì)，設(shè)計(jì)特異性引物進(jìn)行克隆、測(cè)序，序列分析表明該基因的ORF序列為984 bp，編碼327個(gè)氨基酸，預(yù)測(cè)該蛋白分子量為37.4 kDa，其等電點(diǎn)為6.15。該蛋白質(zhì)C末端含有6個(gè)高度保守的ZFP結(jié)構(gòu)域，屬于ZFP家族，進(jìn)化分析表明該序列與黑脈

3、金斑蝶鋅指類蛋白ZFP16同源性較高，因此命名為BmZFP16-like。
　　2、構(gòu)建了原核表達(dá)質(zhì)粒pET28a-BmZFP16-like，轉(zhuǎn)化至E. coli Transetta(DE3)，用不同濃度 IPTG進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)。SDS-PAGE和 Western blot的檢測(cè)結(jié)果表明BmZFP16-like融合蛋白能夠在原核表達(dá)系統(tǒng)中高效表達(dá)。通過(guò)Ni柱親和層析純化了該重組蛋白，并制備了多克隆抗體。
　　3、分別提取家蠶絲

4、腺等不同組織及家蠶不同發(fā)育時(shí)期絲腺的RNA和總蛋白，通過(guò)熒光定量PCR和Western blot分析家蠶BmZFP16-like在不同組織及不同發(fā)育時(shí)期的轉(zhuǎn)錄水平和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果表明 BmZFP16-like基因的表達(dá)存在相對(duì)的時(shí)空特異性，其中在絲腺中的表達(dá)量最高，在脂肪體中表達(dá)量最低，從四眠后期開(kāi)始逐漸升高，到五齡7天達(dá)到最高，到預(yù)蛹期基本不表達(dá)，這一表達(dá)模式與絲素重鏈基因（fib-H）的表達(dá)模式類似。
　　4、提取不同品種

5、（P50和H9）的絲腺RNA和總蛋白，運(yùn)用熒光定量PCR法和免疫印跡法檢測(cè)絲腺中 BmZFP16-like的轉(zhuǎn)錄表達(dá)水平和蛋白表達(dá)情況。結(jié)果顯示BmZFP16-like基因在H9中的表達(dá)量要高于P50，由此推測(cè)BmZFP16-like基因很可能參與fib-H基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控。
　　5、對(duì)BmZFP16-like與fib-H的表達(dá)調(diào)控區(qū)相互作用分析，BmZFP16-like第二個(gè)鋅指結(jié)構(gòu)域α螺旋區(qū)的3個(gè)氨基酸可以與fib-H啟動(dòng)子的5