1、木霉菌（Trichoderma spp.）是一類重要的生防真菌資源，在農(nóng)作物病害的綠色防控中具有重要的發(fā)展前景和應(yīng)用價(jià)值。木霉在與宿主植物的互作、促生及生物防治作用的研究將為高效、穩(wěn)定的木霉生防菌制劑的研發(fā)和利用提供重要的理論依據(jù)。根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)（Agrobacterium tumefaciens-mediated transformation,ATMT）的綠色熒光蛋白（Green Fluorescence Protein，GFP）基因

2、的轉(zhuǎn)化方法為微生物互作及與宿主植物互作的研究提供了一個(gè)強(qiáng)有力的工具。鉤狀木霉（Trichoderma hamatum）ACCC31649是一株優(yōu)秀的生防菌株，前期研究表明該菌株具有顯著促進(jìn)黃瓜植株生長(zhǎng)的特性。本研究通過根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的遺傳轉(zhuǎn)化方法，建立了生防鉤狀木霉的遺傳轉(zhuǎn)化體系，篩選獲得了穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)化子T.hamatum-GF21。利用熒光顯微技術(shù)揭示了T.hamatum-GF21在辣椒組織及辣椒根際土壤中的定殖能力和特點(diǎn)，并進(jìn)一步

3、闡明了鉤狀木霉菌株對(duì)辣椒植株的促生作用和對(duì)辣椒疫霉菌（Phytophthora capsici）生防作用的初步研究。本論文的主要研究結(jié)果如下：
　　1、根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)鉤狀木霉的轉(zhuǎn)化體系的構(gòu)建及穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)化子篩選。本研究通過DAPI（4',6-二脒基-2-苯基吲哚）和卡氏白（Calcoflour White）兩種染料對(duì)鉤狀木霉ACCC31649的菌絲及分生孢子的細(xì)胞核進(jìn)行組合染色，結(jié)果表明其為單核細(xì)胞；優(yōu)化 ATMT轉(zhuǎn)化的乙酰丁香

4、酮濃度、分生孢子懸浮液濃度、誘導(dǎo)培養(yǎng)時(shí)間和共培養(yǎng)時(shí)間等轉(zhuǎn)化條件；獲得了鉤狀木霉的GFP標(biāo)記轉(zhuǎn)化子100個(gè)，通過連續(xù)繼代的潮霉素抗性篩選和PCR檢測(cè)，篩選了10個(gè)強(qiáng)綠色熒光和穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)化子。此外，比較了GFP標(biāo)記轉(zhuǎn)化子與野生型菌株其在形態(tài)學(xué)特征、生長(zhǎng)速率、產(chǎn)孢量和生物量等方面的一致性。
　　2、鉤狀木霉菌株在辣椒組織中定殖特點(diǎn)及其對(duì)辣椒幼苗的促生作用。通過木霉孢子液灌根接種4葉期辣椒幼苗，標(biāo)記菌株 T.hamatum-GF21在根

5、際土壤中呈現(xiàn)“先增后降”的數(shù)量變化趨勢(shì)；辣椒組織切片的熒光顯微連續(xù)觀察表明，辣椒根、莖和葉組織中都檢測(cè)到鉤狀木霉菌株的定殖。30天后，鉤狀木霉處理與水處理相比，辣椒植株的株高增長(zhǎng)13.52％，根長(zhǎng)增長(zhǎng)16.19％，鮮重和干重分別增加了43.75％和45.28％，而且野生型菌株與GFP標(biāo)記菌株對(duì)辣椒的促生作用沒有顯著差異。
　　3、鉤狀木霉對(duì)辣椒疫霉菌的生防作用的初步研究。通過平板對(duì)峙實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，鉤狀木霉菌株對(duì)辣椒疫霉菌生長(zhǎng)抑制率