1、目的:檢測(cè)皮質(zhì)抑素(CST)在尋常型銀屑病病人血漿及皮膚中的表達(dá),并在表皮生長(zhǎng)因子(EGF)誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞增殖模型中觀察外源性應(yīng)用CST對(duì)HaCaT細(xì)胞增殖的影響,初步探討CST在銀屑病發(fā)病機(jī)制中的作用。
　　 方法:
　　 1.ELISA法檢測(cè)72例尋常型銀屑病和76例正常對(duì)照組血漿中的CST的表達(dá),免疫組化方法檢測(cè)14例銀屑病病人(取自上述72例中)皮損區(qū)及正常對(duì)照皮膚中的CST的表達(dá)。
　　 2.1×

2、106/孔HaCaT細(xì)胞種六孔板,培養(yǎng)24小時(shí)后,細(xì)胞免疫組化方法檢測(cè)HaCaT中CST蛋白的表達(dá),RT-PCR方法檢測(cè)CSTmRNA的表達(dá)。
　　 3.按5000/孔接種HaCaT細(xì)胞至96孔板,待細(xì)胞貼壁后,換含10ng/ml EGF的RPMI-1640培基,外源性給予不同濃度的CST(10-9-10-6M)處理含10 ng/ml EGF的HaCaT細(xì)胞24小時(shí),MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖的改變,重復(fù)三次,觀察外源性CET對(duì)EGF

3、誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞增殖的影響并選取最佳皮質(zhì)抑素濃度進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　 4.細(xì)胞免疫組化方法檢測(cè)無CST和EGF的HaCaT細(xì)胞組(空白組),含10 ng/ml EGF的HaCaT細(xì)胞組(對(duì)照組)及含10-6M CST和10 ng/ml EGF的HaCaT細(xì)胞組(實(shí)驗(yàn)組)三組中增殖指標(biāo)Ki-67的變化。
　　 5.酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA法)檢測(cè)以上三組的第二信使cAMP的變化。
　　 結(jié)果:
　　

4、 1.銀屑病病人血漿及皮損中皮質(zhì)抑素的表達(dá)較正常對(duì)照組均顯著下降,但銀屑病病人血漿CST表達(dá)水平與PASI積分無顯著相關(guān)性。
　　 2.CST蛋白在HaCaT細(xì)胞胞漿中有表達(dá)。且CSTmRNA(173bp)在HaCaT細(xì)胞有表達(dá)。
　　 3.不同濃度CST(10-9-10-6 M)呈濃度依賴性抑制10 ng/ml的EGF誘導(dǎo)的HaCaT細(xì)胞的增殖。在10-6M時(shí)有最好的抑制效應(yīng),抑制率54.62％。
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