1、目的:通過研究自身免疫性甲狀腺疾病(autoimmune thyroid disease,AITD)患者體內(nèi)濾泡輔助性T淋巴細胞(follicular helper T cell,Tfhcell)的變化,探討Tfh細胞在AITD致病機制中發(fā)揮的作用。
　　 方法:
　　 1.采用流式細胞術(shù)(flow cytometer,FCM)檢測AITD(36例Graves病和29例橋本甲狀腺炎)患者和健康對照者外周血單個核細胞(pe

2、ripheral blood mononuclear cell,PBMC)中Tfh細胞的比例,并進行比較。
　　 2.應(yīng)用化學發(fā)光免疫分析法檢測AITD患者的抗甲狀腺過氧化物酶抗體(anti-thyroperoxidase antibody,TPO-Ab)、抗促甲狀腺激素受體抗體(anti-TSH receptor antibody,TSHR-Ab)和抗甲狀腺球蛋白抗體(anti-thyroglobulin antibody,T

3、g-Ab)的水平,以及游離三碘甲腺原氨酸(free triiodothyronine,FT3)、游離甲狀腺素(free thyroxine,FT4)的水平,分析各種抗體水平,激素水平與Tfh細胞比例的相關(guān)性。
　　 3.追蹤隨訪8例Graves病(Graves’disease,GD)患者,通過FCM檢測患者治療前后Tfh細胞比例的變化情況。
　　 4.磁珠分選人PBMC中CD4+T細胞,用植物血細胞凝集素(phytohe

4、magglutinin,PHA)刺激后,采用實時熒光定量PCR(real-timefluorescence quantitative PCR,qRT-PCR)檢測患者和健康對照者CD4+T細胞中IL-21和Bcl-6 mRNA的相對表達情況。酶聯(lián)免疫吸附試驗(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)檢測CD4+T細胞培養(yǎng)上清中IL-21的分泌情況。
　　 5.取5例橋本甲狀腺炎(Hashi

5、moto thyroiditis,HT)患者甲狀腺組織,進行病理切片,免疫熒光染色后,采用激光共聚焦顯微鏡觀察CD4+CXCR5+細胞的分布情況。分離甲狀腺組織單個核細胞(thyroidmononuclear cell,TMC),FCM檢測CD4+CXCR5+T淋巴細胞上ICOS的表達情況;RT-PCR檢測TMC中IL-21和Bcl-6 mRNA的相對表達情況。
　　 結(jié)果:
　　 1.以CD4+CXCR5+ICOShi

6、gh或CD4+CXCRS+PD-1high來標記外周血中Tfh細胞;GD組、HT組與健康對照組相比,Tfh細胞的比例均有明顯上調(diào)(P＜0.05;P＜0.05)。
　　 2.GD組和HT組患者具有較高水平的相關(guān)自身抗體。GD組患者血清TSHR-Ab、TPO-Ab水平分別與外周血中的Tfh細胞的比例具有正相關(guān)性(P=0.0130,r=0.4893;P=0.0341,r=0.4253);HT組患者血清Tg-Ab、TPO-Ab水平分別與

7、外周血中的Tfh細胞的比例具有正相關(guān)性(P=0.0168,r=0.5152;P=0.0417,r=0.4479)。
　　 3.GD組患者具有較高的FT3和FT4水平,血清FT3、FT4水平分別與外周血中的Tfh細胞的比例具有一定的正相關(guān)性(P=0.0305,r=0.4332;P=0.0611,r=0.3798)。
　　 4.跟蹤隨訪了8例GD患者,其中有4例患者治療后外周血中Tfh細胞的比例有不同水平的降低。
　　

8、 5.GD組和HT組患者外周血中CD4+T細胞的IL-21 mRNA相對表達水平均顯著高于健康對照組(P＜0.001;P＜0.05),CD4+T細胞培養(yǎng)上清中IL-21的表達水平均顯著高于健康對照組(P＜0.05;P＜0.001),但兩組Bcl-6 mRNA的相對表達量與健康對照組相比,并無顯著性差異。
　　 6.在HT患者甲狀腺組織局部觀察到CD4+CXCR5+T淋巴細胞的存在,并且這群細胞高表達共刺激分子ICOS;與單純性

9、甲狀腺腫患者相比,HT患者TMC中具有較高的IL-21和Bcl-6 mRNA相對表達水平。
　　 結(jié)論:
　　 1.在AITD(Graves病和HT)患者外周血中觀察到了Tfh細胞(CD4+CXCR5+ICOShighT細胞)比例的增加,在HT患者甲狀腺中也觀察到Tfh細胞的存在。
　　 2.在Graves病和HT患者體內(nèi),Tfh細胞的比例與TSH-Ab、Tg-Ab和TPO-Ab的水平成正相關(guān),并且對于GD患者,