1、目的：建立一種新的大鼠腎小管上皮細(xì)胞NRK-52E缺氧/復(fù)氧模型，為下一步實(shí)驗(yàn)選擇合適的缺氧/復(fù)氧時(shí)間點(diǎn)。 方法：本實(shí)驗(yàn)使用大鼠NRK-52E細(xì)胞。實(shí)驗(yàn)分為對(duì)照組及實(shí)驗(yàn)組，實(shí)驗(yàn)組分為缺氧2、4和6 h及缺氧后復(fù)氧1、12和24h組。缺氧時(shí)換用缺氧液，再置入N294％+O21％+CO25％缺氧環(huán)境；缺氧后換用含10％胎牛血清的DMEM/F12，置入空氣95％+CO25％有氧環(huán)境，制作缺氧/復(fù)氧模型；臺(tái)盼藍(lán)攝取法進(jìn)行細(xì)胞計(jì)數(shù)及檢測(cè)細(xì)

2、胞存活率，分光光度法檢測(cè)培養(yǎng)基中的乳酸脫氫酶(LDH)含量，用流式細(xì)胞術(shù)(Anncxin-V/PI雙標(biāo)記)及TUNEL法檢測(cè)細(xì)胞凋亡。 結(jié)果： 1、臺(tái)盤(pán)藍(lán)活細(xì)胞計(jì)數(shù)大鼠腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)缺氧/復(fù)氧處理后，與對(duì)照組比較，臺(tái)盼藍(lán)攝取率顯著提高，細(xì)胞存活率顯著下降；實(shí)驗(yàn)組中，復(fù)氧后細(xì)胞存活率較復(fù)氧前明顯降低，在R12到達(dá)最低值，隨之逐漸升高，但是在R24時(shí)仍較復(fù)氧前降低。 2、LDH檢測(cè)大鼠腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)缺氧/復(fù)氧

3、處理后，LDH含量升高。實(shí)驗(yàn)組中，復(fù)氧后LDH值較復(fù)氧前明顯升高，在R12到達(dá)最高值，隨之逐漸降低，但是在R24時(shí)仍較復(fù)氧前高。 3、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡大鼠腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)缺氧/復(fù)氧處理后，與對(duì)照組比較，同時(shí)被Armexin V-FITC和碘化丙啶染色的細(xì)胞明顯增多，H4/R12細(xì)胞凋亡比率最大為21.7％。 4、TUNEL法檢測(cè)大鼠腎小管上皮細(xì)胞經(jīng)過(guò)缺氧/復(fù)氧處理后，與對(duì)照組比較，TUNNEL陽(yáng)性細(xì)胞明顯增加。H