1、目的:
　　本實驗通過對高糖作用下大鼠腎小管上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)組學(xué)動態(tài)變化的觀察，了解高糖環(huán)境對大鼠腎小管上皮細(xì)胞蛋白質(zhì)成分的影響，從而希望找到糖尿病腎病發(fā)生發(fā)展的機制。
　　方法:
　　1.將腎小管上皮細(xì)胞分別置于含正常糖濃度組（含糖5.5mM）、高糖組（含糖30mM）的培養(yǎng)基中進(jìn)行體外培養(yǎng)，分別在8小時、72小時、25天后分別提取細(xì)胞總蛋白。'
　　2.將分離的總蛋白運用雙向電泳技術(shù)進(jìn)行分離。
　　3.分離

2、后的凝膠應(yīng)用Image Master2D Platinum6.0軟件對其2-DE圖像進(jìn)行分析，通過統(tǒng)計學(xué)方法評價雙向凝膠電泳結(jié)果的重復(fù)性和可靠性，運用方差不對齊的t檢驗獲得P值，P<0.05并且該點的volume％值變化超出2倍作為標(biāo)準(zhǔn)，找出差異蛋白點。
　　4.通過質(zhì)譜技術(shù)（MALDI-TOF, MALDI-TOF-TOF, LC-MS-MS）對找出的差異蛋白點進(jìn)行鑒定，然后對鑒定出的差異蛋白進(jìn)行生物信息學(xué)分析。
　　5.

3、利用MASCOT數(shù)據(jù)庫進(jìn)行檢索，其差異蛋白點的判定標(biāo)準(zhǔn)是以得分大于60，并且覆蓋序列大于15%，測量與預(yù)測分子量之間相差小于30%，測得的等電點與預(yù)測等電點相差小于2.0。最后再利用PUBMED查詢差異蛋白的功能。
　　結(jié)果:
　　1.雙向電泳凝膠平均獲得了蛋白點956.33±21.37個，832個點在所有膠上均出現(xiàn)，匹配率為87%。
　　2.運用雙向電泳技術(shù)分析高糖及正常培養(yǎng)基的腎小管上皮細(xì)胞的蛋白組學(xué)，發(fā)現(xiàn)8個差異

4、蛋白點經(jīng)過矯正后（P<0.05）通過質(zhì)譜鑒定，它們分別是：膜突蛋白（moesin），膜聯(lián)蛋白A4（annexin A4），電壓依賴性陰離子通道蛋白2（voltage-dependent anion-selective channel protein2 VDAC2），磷酸變位酶1（phosphoglycerate mutase1），細(xì)胞核酸結(jié)合蛋白2（cellular nucleic acid-binding protein isofor

5、m2），基質(zhì)細(xì)胞衍生因子2-類蛋白1前體（stromal cell-derived factor2-like protein1 precursor，SDF2L1），加帽蛋白，凝溶膠蛋白樣，異構(gòu)型CRA_b（capping protein, gelsolin-like, isoform CRA_b），核苷二磷酸激酶A（nucleoside diphosphate kinase A）。
　　結(jié)論:
　　通過對蛋白組學(xué)的研究，找出