1、做了以下幾個(gè)方面的工作:1用5umol/L、10umol/L的5-azaC處理HSG細(xì)胞后,細(xì)胞的生長狀態(tài)發(fā)生了變化.部分細(xì)胞從瓶底脫落到培養(yǎng)液中,從生長曲線上可以看到細(xì)胞生長受到抑制,抑制率分別為82％和95%,瓊脂克隆試驗(yàn)表明加入5umol/L 5-azaC處理后細(xì)胞克隆形成率降低,由39.7%降為19.6%,細(xì)胞分裂指數(shù)檢測表明5-azaC處理后細(xì)胞分裂指數(shù)降低,由21.6%變?yōu)?2.6%,細(xì)胞周期檢測發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周期主要被阻斷在G1

2、期,免疫組化染色發(fā)現(xiàn)5-azaC處理后PCNA和CyclinD1表達(dá)較處理前減弱,嗜銀蛋白染色分析表明5-azaC處理后嗜銀蛋白顆粒減少.HSG細(xì)胞用5-azaC處理后接種到裸鼠皮下,與對照組相比,5-azaC處理組細(xì)胞成瘤性降低,腫瘤的重量由0.5510±0.1188g降為0.1395±0.0214g.以上結(jié)果都表明5-azaC可以抑制HSG細(xì)胞的生長.2用5umol/L 5-azaC處理HSG后,細(xì)胞形態(tài)發(fā)生了一些變化,胞漿中出現(xiàn)類

3、似顆粒狀物,RT-PCR產(chǎn)物檢測結(jié)果可見用5-azaC處理后在201bp處出現(xiàn)光亮條帶,而對照組則未見到,說明HSG細(xì)胞可能分化成了腺泡細(xì)胞.3 5umol/L 5-azaC處理HSG 24h、48h、72h后進(jìn)行流式細(xì)胞儀檢測,結(jié)果發(fā)現(xiàn)5-azaC處理后,HSG細(xì)胞G1期前面出現(xiàn)亞二倍體峰,光鏡觀察可見部分細(xì)胞有出芽、發(fā)泡現(xiàn)象,細(xì)胞體積縮小,電鏡觀察可見核內(nèi)染色質(zhì)濃縮,形成染色質(zhì)塊聚集在核的邊緣,或形成指環(huán)平鋪在核膜下.胞質(zhì)回縮,細(xì)胞

4、膜發(fā)泡,出現(xiàn)凋亡小體.4 5umol/L 5-azaC可以使HSG細(xì)胞發(fā)生凋亡,免疫組化結(jié)果顯示用5-azaC處理后HSG細(xì)胞FAP-1表達(dá)減弱,說明FAP-1在5-azaC誘導(dǎo)的HSG凋亡中起一定作用.瓊脂糖電泳結(jié)果可見5-azaC處理后形成DNA ladder,Western blot結(jié)果顯示5-azaC處理后,FAP-1蛋白表達(dá)降低.將HSG進(jìn)行FAP-1反義寡核苷酸轉(zhuǎn)染,轉(zhuǎn)染后,HSG細(xì)胞形態(tài)未發(fā)生明顯變化,RT-PCR產(chǎn)物凝膠

5、電泳可見607bp附近出現(xiàn)光亮條帶,說明FAP-1反義寡核苷酸己成功轉(zhuǎn)入HSG細(xì)胞,用5-azaC處理轉(zhuǎn)染FAP-1反義寡核苷酸的HSG細(xì)胞后,細(xì)胞凋亡數(shù)較轉(zhuǎn)染前增加.以上結(jié)果說明FAP-1在5-azaC誘導(dǎo)的HSG細(xì)胞凋亡中起一定作用.另外,5-azaC處理后,bcl-2和p53表達(dá)減弱,說明bcl-2和p53也可能與5-azaC誘導(dǎo)的HSG細(xì)胞的凋亡有關(guān).上述研究結(jié)果表明,5-azaC具有抑制HSG細(xì)胞增殖的作用,能誘導(dǎo)HSG細(xì)胞使