1、分類號Q78單位代碼10447密級無學號1410150401碩士學位論文油菜花葉病毒（油菜花葉病毒（MVMV）126kDa126kDa復制酶基因在擬南芥中的復制酶基因在擬南芥中的可誘導表達可誘導表達InducibleExpressionofMV126kDaReplicaseGeneinArabidopsisthaliana作者姓名黃學娟黃學娟專業(yè)名稱微生微生物學物學指導教師姓名胡全安胡全安曹雪松曹雪松學院生命科學學院生命科學學院論文提交

2、日期20172017年0303月聊城大學碩士學位論文i摘要植物病毒危害農作物的形勢十分嚴重，是導致植物病害的主要原因之一。植物病毒對農作物的危害不僅嚴重威脅農業(yè)生產結構，對農業(yè)經濟也造成了嚴重損失。因此，如何防治植物病毒病害早已是科學家們所需要研究和解決的重要課題。隨著研究發(fā)現，植物本身具有能夠抵抗植物病毒的防御機制，即RNA干擾機制。RNA干擾是由雙鏈RNA分子介導的、序列特異的轉錄后基因沉默現象。植物體內的小RNA在植物對抗病毒的R

3、NA干擾機制中起著核心作用，它來自于非蛋白編碼RNA的前體。小RNA通過堿基互補配對原則與靶mRNA結合起負調控的作用，利用sRNA抗植物病毒是近年來所研究的一種有效手段。但是病毒為了有效侵染植物，就必須抑制植物體內RNAi機制。因此，植物病毒同時也能夠編碼蛋白在RNAi的不同步驟起到抑制作用，這類蛋白被稱為基因沉默抑制因子。油菜花葉病毒MV作為危害油菜等作物生產的病毒之一，屬于煙草花葉病毒屬。MV基因結構中的復制酶基因表達的126kD

4、a蛋白是一種基因沉默抑制因子。126kDa復制酶蛋白在體外（invitro）可結合21nt左右的小RNA，油菜花葉病毒的侵染不僅能引起21nt小RNA的積累，還對該類小RNA的底物mRNA的表達產生了影響。為了進一步驗證復制酶蛋白在體內（invivo）對21nt小RNA的結合富集作用，同時為了更好地了解復制酶蛋白對植物內源轉錄本的影響，以及其如何通過影響小RNA進而影響小RNA底物mRNA的表達，我們嘗試在植物中過量表達該蛋白。但是前期

5、的實驗沒有獲得持續(xù)過量地表達該蛋白的植物，這可能是因為過量表達該蛋白對植物有害。本研究利用植物的可誘導表達技術，在擬南芥中有條件地表達126kDa復制酶蛋白，進而研究MV126kDa復制酶蛋白對植物內源小RNA代謝與功能的影響。這些內源小RNA與植物對病毒侵染的應答有著緊密聯(lián)系，所以研究這些富集的小RNA類別及作用機制也有助于抗病育種的進一步發(fā)展。SilwetL77是一種非離子型的表面活性劑，常用于植物的轉化。本研究發(fā)現，SilwetL