苜?；ㄈ~病毒復(fù)制酶基因不同片段介導(dǎo)的抗病性研究.pdf_第1頁
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1、本實(shí)驗(yàn)將苜?；ㄈ~病毒(Alfalfa mosaic virus，AIMV)復(fù)制酶P<,2>亞基基因全長(zhǎng)cDNA序列及3’端非編碼區(qū)序列構(gòu)建到植物雙元表達(dá)載體pROK Ⅱ中，分別得到重組表達(dá)載體pROKAMVF、pROKAMV3N。在實(shí)驗(yàn)室前期工作中已將AIMV復(fù)制酶基因的5’端1／2cDNA序列、3’端1／2 cDNA序列分別構(gòu)建到植物雙元表達(dá)載體pROK Ⅱ中，得到重組植物表達(dá)載體pROKAMV5、pROKAMV3。 將上述

2、四種重組表達(dá)載體經(jīng)農(nóng)桿菌LBA4404介導(dǎo)轉(zhuǎn)化煙草，獲得相應(yīng)的轉(zhuǎn)化植株，進(jìn)行PCR檢測(cè)，結(jié)果證明目的基因已整合到煙草基因組中。pROKAMV5轉(zhuǎn)化煙草獲得24個(gè)轉(zhuǎn)基因株系共90株植株；pROKAMV3轉(zhuǎn)化煙草獲得18個(gè)轉(zhuǎn)基因株系共69株植株；pROKAMVF轉(zhuǎn)化煙草獲得4株轉(zhuǎn)基因植株；pROKAMV3N轉(zhuǎn)化煙草獲3株轉(zhuǎn)基因植株。 A1MV接種后檢測(cè)抗病性結(jié)果為：pROKAMV5轉(zhuǎn)基因植株中10個(gè)株系對(duì)A1MV接種表現(xiàn)完全抗性，p

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