馬鈴薯Y病毒NIa蛋白酶基因介導的抗病性研究.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、為了制備PVY-C NIa的抗血清,首先構建了6kD-NIa和VPg基因片段的原核表達載體.酶切和PCR 擴增得到PVY-C 6kD-NIa和VPg基因片段,分別克隆到表達載體pET-28a中,酶切鑒定、PCR擴增和序列測定結果證明目的基因正確插入到了載體pET-28a中,而且含有正確的閱讀框架.經IPTG誘導后,分別表達了分子量約為27kDa和25kDa的蛋白.純化了VPg蛋白免疫兔子后,得到效價為1:3000的抗血清.Western

2、 blot分析表明VPg抗血清能夠與感染PVY-C植物中的NIa蛋白發(fā)生特異免疫反應,成功地獲得了特異性VPg多克隆抗體.對轉PVY-C 6kD-NIa基因煙草T<,2>和T<,3>代進行抗病性試驗,攻毒結果分三種類型:全部表現(xiàn)為抗病和恢復;抗性喪失,全部表現(xiàn)為感病;抗病、恢復和感病三種表現(xiàn)型,發(fā)生了性狀分離.對T<,2>代和T<,3>代轉基因煙草PCR檢測和Southern blot結果表明PVY-C 6kD-NIa基因不僅整合到煙草

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