1、百合是多年生球根花卉，屬于單子葉植物，具有較高的經(jīng)濟(jì)價(jià)值和觀賞價(jià)值，現(xiàn)已成為世界上最重要的鮮切花之一。植物分子生物學(xué)的迅速發(fā)展，為改良植物品質(zhì)和性狀提供了全新的途徑，利用轉(zhuǎn)基因的手段改良百合性狀和品質(zhì)變得切實(shí)可行。農(nóng)桿菌作為遺傳轉(zhuǎn)化載體成本低廉、轉(zhuǎn)化率較高，是應(yīng)用最廣泛的外源基因?qū)敕?。但是百合是單子葉植物，對(duì)農(nóng)桿菌具有不敏感性，所以要探索有效途徑提高農(nóng)桿菌介導(dǎo)百合轉(zhuǎn)化率。本實(shí)驗(yàn)以麝香百合的愈傷組織為轉(zhuǎn)化材料，以pBI121(無外源基因

2、)為轉(zhuǎn)化載體，研究農(nóng)桿菌介導(dǎo)的麝香百合轉(zhuǎn)化方法，為麝香百合的遺傳轉(zhuǎn)化打下基礎(chǔ)。 1．建立高頻再生體系百合再生植株小鱗片和百合花絲均能誘導(dǎo)出大量愈傷組織，且愈傷組織分化率都比較高，所以將二者進(jìn)行比較，選擇最佳受體材料。小鱗片在激素濃度為6-BA 0.5mg/L，NAA0.1mg/L時(shí)再生小植株小鱗片的愈傷形成率最高，達(dá)到90％；而花絲在激素濃度為6-BA1.0mg/L，NAA 0.5mg/L愈傷形成率最高，達(dá)到86.3％，所以，再

3、生苗小鱗片的愈傷形成能力要比花絲強(qiáng)。小鱗片在激素濃度為6-BA 0.5 mg/L，NAA 0.05 mg/L時(shí)愈傷組織分化率最高，達(dá)到93.8％；而花絲在激素濃度為6-BA1.0mg/L，NAA 0.2mg/L時(shí)，花絲愈傷組織分化率最高，達(dá)到85.0％。所以，再生苗小鱗片的愈傷分化能力要比花絲強(qiáng)。 再生苗小鱗片的愈傷組織形成能力和分化能力都要比花絲高，而且不受季節(jié)的影響，隨時(shí)可以取材，所以最后選擇再生植株小鱗片作為外植體。

4、 2．抗生素篩選壓的確定從外植體的卡那霉素(Km)抗性篩選和頭孢霉素(Cef)抑菌試驗(yàn)可知，小鱗片愈傷組織塊在Km125mg/L的濃度下分化率為2.5％，是亞致死濃度，適合作為小鱗片愈傷組織抗性篩選壓；當(dāng)生根培養(yǎng)基中Km為125mg/L時(shí)，鱗芩葉開始變黃，不再有根生成，該濃度也適合作為篩選轉(zhuǎn)化植株生根的臨界濃度。Cef的濃度為400mg/L時(shí)抑菌而不傷害外植體，可做為抑菌濃度。 3．影響轉(zhuǎn)化率的因素隨著共培養(yǎng)基中NH<,4>N

5、O<,3>濃度的降低，農(nóng)桿菌的轉(zhuǎn)化率升高，當(dāng)共培養(yǎng)基中完全去除NH<,4>NO<,3>，瞬時(shí)表達(dá)最高，可達(dá)到60％，所以共培養(yǎng)基選擇無NH<,4>NO<,3>的MS培養(yǎng)基。 以MS(pH5.8)為侵染液時(shí)轉(zhuǎn)化率為61.3％，以YEB(pDH7.0)為侵染液時(shí)轉(zhuǎn)化率為16.3％，前者遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于后者，所以選擇MS為侵染液。 菌液濃度過低、侵染時(shí)間過短則農(nóng)桿菌對(duì)愈傷組織的侵染不夠充分，濃度過高、侵染時(shí)間過長則對(duì)愈傷組織塊有毒害作