1、研究背景：糖尿病腎病(DN)是糖尿病(DM)最嚴重的并發(fā)癥之一，在西方國家，糖尿病腎病(DN)已成為終末期腎臟疾病(ESRD)的主要病因。據(jù)我國1999年首次透析移植登記報告結(jié)果顯示，糖尿病腎病占血液透析患者的13.5％，僅次于慢性腎小球腎炎，居第二位[1]。資料表明，近年來由于中國經(jīng)濟的快速發(fā)展，人們生活水平提高，飲食結(jié)構變化，DM的發(fā)病率在逐年增加，專家們預測21世紀DN將是ESRD的最重要的發(fā)病原因。由于糖尿病腎病診治的醫(yī)療費用昂

2、貴，且治療效果欠佳，特別是DN出現(xiàn)慢性腎衰后由于透析腎移植而給國家、社會及患者家人帶來沉重的經(jīng)濟負擔是日趨突出的社會問題。因此，如何早期發(fā)現(xiàn)DN、早期采取防治措施能有效地延緩DN病程的進展，已成為當今人們倍為關注的課題。 轉(zhuǎn)化生因子-β(transforminggrowthfactor-β)是DM發(fā)展為DN的核心問題，它與腎臟固有細胞增殖、腎小球肥大、細胞外基質(zhì)(ECM)增多密切相關[2]。已有大量研究證實，TGF-β在DN發(fā)病

3、過程中的起到了重要作用。如TGF-β可通過氧化應激、葡萄糖激酶、Ang-Ⅱ等細胞因子激活后促使腎小球系膜細胞增殖、內(nèi)皮細胞損傷、足細胞功能與結(jié)構變化，進而腎小球肥大、ECM聚積，最終出現(xiàn)腎小球纖維化。雖然隨著DN發(fā)病機制研究的不斷深入，取得了許多可喜的成果，但迄今為止DN的確切發(fā)病機制仍不甚清楚，特別是TGF-β通過哪幾個信號通路激活后最終將何種信息傳導給何種靶基因，從而促使腎組織內(nèi)膠原合成增加、ECM聚積等問題，目前仍是從事DM及DN

4、研究工作者感到困惑的問題。 c-myc是一種原癌基因，它廣泛分布于人體正常細胞內(nèi)，通常情況下c-myc在腎組織中只有低水平表達或不表達[3]。應用脂多糖(LPS)、血小板衍生生長因子(PDGF)等有絲分裂原刺激早期生長的細胞以及組織損傷后處于再生修復期的細胞，此時組織細胞的c-myc表達將增強，提示c-myc表達與細胞增殖有密切的關系，說明c-myc可能直接參與細胞生長周期的調(diào)控。c-myc表達產(chǎn)物可特異性地與細胞內(nèi)DNA結(jié)合，

5、加速細胞周期從G1-S期轉(zhuǎn)變[4]。國外文獻報道，心肌細胞內(nèi)c-myc基因表達增加與心肌肥厚有關，c-myc表達變化可能是心肌肥厚時一系列信號介導過程的一部分[5]。有學者的體外研究顯示，應用c-myc反義寡聚脫氧核苷酸中止c-myc表達，可阻斷這一過程，使細胞增殖停止；而重新活化c-myc表達又可使細胞繼續(xù)循細胞周期進行增殖[6]；國內(nèi)劉志紅教授等研究發(fā)現(xiàn)，急性腎損傷鼠模型通過冬蟲夏草治療后，腎小管上皮細胞c-myc持續(xù)高表達，c-m

6、yc促進腎小管上細胞增殖從而使損傷的腎小管上細胞得到及時修復[7]。上述研究均表明，c-myc基因直接參與細胞增殖與生長的調(diào)控[8]。隨著對c-myc基因研究的深入，特別是c-myc基因在細胞分裂增殖及修復過程中所發(fā)揮的作用，人們也開始對c-myc在慢性腎臟疾病中及DN的作用及c-myc與TGF-β兩者之間的關系倍感興趣。有研究顯示，TGF-β可通過多種途徑調(diào)節(jié)c-myc的表達，如應用TGF-β抑制劑或抗體可下調(diào)c-myc的表達[9.1

7、0]，并抑制腎小球肥大。根據(jù)他人研究的結(jié)果表明，TGF-β具有調(diào)控c-myc基因表達的作用，而諸多的研究證明TGF-β在DN發(fā)病機制中起到了十分重要的作用，c-myc是否與DN發(fā)生有直接聯(lián)系?c-myc是否作為TGF-β下游靶基因而發(fā)揮生物效應?干預c-myc基因表達后能否起到阻止DN發(fā)生發(fā)展或起到保護腎功能作用?是本研究擬重點探討的問題。因此本研究通過制備糖尿病腎病大鼠模型，觀察鼠腎組織TGF-β、c-myc基因表達狀況，并采用冬蟲夏

8、草進行干預試驗，以觀察冬蟲夏草對STZ鼠腎組織TGF-β、c-myc基因表達的影響，了解c-myc在DN發(fā)病中所發(fā)揮的作用，從而進一步探討DN的發(fā)病機制，為DN早期防治及開發(fā)冬蟲夏草制劑在DN早期治療中臨床應用而提供理論依據(jù)。 目的：①研究糖尿病腎病模型鼠腎組織TGF-β與c-myc的表達狀況及二者之間的關系，探討c-myc基因在DN發(fā)病中的作用和意義；②研究冬蟲夏草對TGF-β與c-myc基因表達的影響，為DN早期防治提供理論

9、依據(jù)。 方法：將30只鏈脲佐菌素誘導的糖尿病腎病大鼠模型，隨機分為2組：D組為糖尿病腎病未干預組(15只)；C組為糖尿病腎病冬蟲夏草干預組(15只)，另將15只鼠齡、體重相匹配的大鼠作為N組即正常對照組。糖尿病腎病模型制備成功后開始給予藥物干預試驗，即C組冬蟲夏草1.0g·kg-1·d-1，每上午灌胃1次，連續(xù)2-6周，冬蟲夏草干預后第2-6周將各組實驗鼠置代謝籠內(nèi)收集24h尿；然后從處死鼠心臟取血，離心上清液-70℃保存；并分

10、離出雙腎，左腎稱重，記錄其重量，取右腎組織石蠟包埋后切片進行特殊染色，觀察腎組織結(jié)構變化并用免疫組化方法檢測大鼠腎臟TGF-β、c-myc的表達水平并進行二者相關分析。 結(jié)果：①與正常對照組比較DN大鼠除24h尿蛋白排泄量增加，血肌酐(Scr)、膽固醇(CHO)、甘油三酯(TG)均升高外、血TGF-β、血Col-Ⅳ水平亦上升；②STZ鼠腎組織采用HE、masson染色觀察到DN大鼠腎小球肥大、ECM增多，腎間質(zhì)纖維化、部分腎間質(zhì)

11、有大量炎性細胞浸潤；③采用免疫組化方法檢測到DN大鼠腎組織TGF-β、c-myc呈現(xiàn)高表達；冬蟲草干預治療后腎組織TGF-β、c-myc表達下調(diào)。④冬蟲夏草干預后DN大鼠尿蛋白排泄量減少；血Scr、血CHO、血TGF-β、血Col-Ⅳ等指標均降低；HE、masson特殊染色下觀察到系膜基質(zhì)增多狀況好轉(zhuǎn)，腎間質(zhì)纖維化有所減輕，間質(zhì)炎性細胞浸潤減少；免疫組化結(jié)果示腎組織TGF-β、c-myc表達下調(diào)，且二者呈正相關關系。 結(jié)論：①D

12、N模型大鼠除尿蛋白排泄量增加腎功能異常、血脂升高以外還出現(xiàn)血TGF-β、血Col-Ⅳ水平異常；②DN大鼠可有病理結(jié)構異常如系膜細胞基質(zhì)增多，間質(zhì)病變，這些結(jié)構改變均是DN早期腎纖維化表現(xiàn)的基本病理改變；③DN大鼠腎組織在TGF-β表達上調(diào)同時c-myc亦表達上調(diào)，二者呈正相關關系，推測DN時TGF-β有可能通過c-myc作為靶基因而促使ECM合成增加；④冬蟲夏草可使TGF-β及c-myc表達下調(diào)，這可能是冬蟲夏草保護DN腎功能的機制所在