1、目的:探討小分子EGFR酪氨酸激酶受體抑制劑吉非替尼能否增加肺癌細胞株HCC827和H358的放療敏感性及其機制。
　　方法:體外培養(yǎng)人非小細胞肺癌細胞株HCC827及H358,兩株細胞均分為兩組:單純X線組和X線+吉非替尼組。對照組行單純X線照射,實驗組先用1μmol/L吉非替尼作用24h后再行X線照射。利用克隆形成實驗檢測細胞克隆形成率,單擊多靶模型擬合曲線計算SF2值,確定兩株細胞經(jīng)過不同處理后的放射敏感性的差異;激光共聚焦

2、顯微鏡(Confocal)觀察4Gy照射后細胞核中各時間段磷酸化H2AX(g-H2AX)的表達,分析DSB修復(fù)情況;Confocal觀察4Gy照射后EGFR在細胞中的定位與變化;細胞經(jīng)4Gy照射后,分別提取胞漿胞核蛋白,western blotting檢測胞漿,胞核中EGFR的表達變化情況,確定EGFR蛋白是否入核及入核程度。
　　結(jié)果:克隆形成實驗中,對于H358細胞,X線+吉非替尼組在各放療劑量點的細胞存活率均小于單純X線組,

3、對照組SF2值為0.433,實驗組SF2值為0.355。而對于HCC827細胞,實驗組與對照組在各放療劑量點的細胞存活率較為接近,對照組 SF2值為0.223,實驗組SF2值為0.242;激光共聚焦顯微鏡觀察4Gy照射后各時間段實驗組H358細胞核中g(shù)-H2AX斑點多于對照組,且持續(xù)時間更長。而對于HCC827細胞,對照組和實驗組的g-H2AX斑點在各時間段并無明顯差異;激光共聚焦顯微鏡觀察4Gy照射后對照組H358細胞的EGFR蛋白在

4、1h內(nèi)入核,且在1h處達到高峰,經(jīng)吉非替尼處理后EGFR蛋白幾乎不入核,均在胞漿表達。而對于HCC827細胞,實驗組及對照組的EGFR表達位置均在胞漿中,胞核中很少或者幾乎沒有,可認為并無入核現(xiàn)象;Western blotting結(jié)果顯示,H358細胞在經(jīng)4Gy照射后有入核現(xiàn)象,而預(yù)先經(jīng)吉非替尼處理后再行X線照射,EGFR蛋白幾乎不在核內(nèi)表達仍位于胞漿內(nèi)。而對于HCC827細胞,實驗組及對照組的EGFR蛋白均在胞漿中表達,胞核中很少或沒