1、CA是日本在1984年從一種鏈霉菌(Streptomyces tssukubaensis)No999的發(fā)酵產(chǎn)物中分離得到的大環(huán)內(nèi)酯類免疫抑制劑。作為一種強(qiáng)效的新型免疫抑制劑，本品對(duì)T細(xì)胞具有選擇性的抑制作用，主要是通過(guò)抑制TH細(xì)胞釋放IL-2、IL-3、IFN-γ，以及抑制IL-2R的表達(dá)而發(fā)揮其強(qiáng)大的免疫抑制作用。CA的免疫抑制作用是環(huán)孢霉素A(CsA)的10-100倍且具有較低的不良反應(yīng)，同時(shí)可逆轉(zhuǎn)已發(fā)生的排異反應(yīng)，因此CA已廣泛應(yīng)

2、用于肝、腎等多種器官移植的免疫抑制治療。
　　 由于CA在水中的溶解度極低，溶解度僅為2-3μg/mL，口服給藥時(shí)往往不能完全吸收，限制了其藥理作用的充分發(fā)揮。納米混懸技術(shù)是近幾年發(fā)展起來(lái)的一種納米載藥系統(tǒng)，它能夠提高難溶性藥物飽和溶解度和溶出速率，提高難溶性藥物的生物利用度；另外，具有制備工藝簡(jiǎn)單、載藥量高等特點(diǎn)。本研究將納米混懸技術(shù)引入CA的制劑研究中，這對(duì)其它難溶性藥物的制劑研究具有參考意義。
　　 目的：選擇合適

3、的處方和工藝，制備CA納米混懸液，并通過(guò)冷凍干燥將其制成納米凍干粉。對(duì)CA混懸液中納米粒子的微觀形態(tài)進(jìn)行相關(guān)表征。建立CA體內(nèi)、外分析方法，對(duì)CA納米混懸劑的理化性質(zhì)和穩(wěn)定性進(jìn)行研究，并對(duì)其生物利用度進(jìn)行考察。
　　 方法：
　　 1.CA納米混懸劑的制備：在預(yù)實(shí)驗(yàn)的基礎(chǔ)上，初步確定CA納米混懸液的制備方法，并以納米粒粒徑、多分散性和Zeta電位為評(píng)價(jià)指標(biāo)對(duì)表面活性劑種類、表面活性劑用量、藥物濃度和高壓勻質(zhì)工藝參數(shù)等因素

4、進(jìn)行了單因素考察，并通過(guò)四因素三水平正交實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，最終確定制備CA納米混懸液的最佳處方和工藝條件。在研究中發(fā)現(xiàn)CA納米混懸液在長(zhǎng)期儲(chǔ)存過(guò)程中納米粒子會(huì)發(fā)生聚集和沉降現(xiàn)象，因此將納米粒進(jìn)行冷凍干燥以提高制劑的穩(wěn)定性。
　　 2.CA納米混懸劑的質(zhì)量評(píng)價(jià)：用透射電鏡對(duì)納米粒的形狀和表面形態(tài)進(jìn)行考察，并用粒徑分布儀對(duì)粒徑分布進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，用Zeta電位分析儀測(cè)定其Zeta電位，HPLC法測(cè)定含量和相關(guān)物質(zhì)。
　　 3.CA納米混懸

5、劑的穩(wěn)定性試驗(yàn)：按最佳處方制備CA納米混懸劑凍干粉，分別進(jìn)行高溫試驗(yàn)、高濕試驗(yàn)、強(qiáng)光照射試驗(yàn)、加速試驗(yàn)和長(zhǎng)期穩(wěn)定性試驗(yàn)，對(duì)其穩(wěn)定性進(jìn)行考察。
　　 4.CA納米混懸劑的藥代動(dòng)力學(xué)研究：以健康雄性家犬為試驗(yàn)動(dòng)物，采用單劑量、雙周期自身交叉試驗(yàn)方案設(shè)計(jì)，考察口服CA納米混懸劑膠囊的藥代動(dòng)力學(xué)，并與參比制劑進(jìn)行比較。采用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定不同時(shí)間的血藥濃度。采用3p97程序?qū)ρ帩舛葦?shù)據(jù)進(jìn)行處理，對(duì)比兩制劑在家犬體內(nèi)的生物利用度

6、。
　　 結(jié)果：
　　 1.通過(guò)預(yù)實(shí)驗(yàn)確定采用沉淀法與高壓均質(zhì)法聯(lián)用技術(shù)制備納米混懸劑。最佳制備處方和工藝為：將200mg表面活性劑泊洛沙姆188和29助懸劑HPMC溶于100mL水制備水相；CA溶于乙醇形成藥物溶液有機(jī)相，藥物濃度為2mg/ml;將CA藥物溶液有機(jī)相滴加到室溫?cái)嚢柘碌乃嘀?；將此粗混懸液置于高壓勻質(zhì)機(jī)，在1300bar壓力下循環(huán)16次，制備CA納米混懸液，加入合適的凍干保護(hù)劑，采用冷凍干燥法將CA納米混

7、懸液凍干。
　　 2.CA納米粒的平均粒徑為254nm，多分散指數(shù)較小(PI=0.016)，Zeta電位為-27.0mv，納米粒為球形或近球形顆粒；CA納米混懸劑的溶出速度較原藥有明顯提高；穩(wěn)定性試驗(yàn)結(jié)果表明CA納米混懸劑在60℃條件下樣品外觀、粒徑、含量無(wú)明顯變化；相對(duì)濕度92.5％條件下，重量變化不明顯，樣品外觀、粒徑和含量均無(wú)明顯變化；在強(qiáng)光4500±500 lx的條件下，外觀、粒徑無(wú)明顯變化，含量略有降低；加速(40℃)

8、和長(zhǎng)期(25℃)試驗(yàn)條件下6個(gè)月內(nèi)，樣品外觀、粒徑、含量均無(wú)明顯變化，結(jié)果表明CA納米混懸劑的穩(wěn)定性較高。
　　 3.藥物動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)表明，口服CA納米混懸劑和上市參比制劑的C(max)分別為32.46ng/mL和26.94ng/mL，T(max)分別為1.44h和1.68h，AUC分別為290.72h*ng/mL和224.16h*ng/mL，與上市參比制劑相比，CA納米混懸劑可提高口服吸收生物利用度，相對(duì)生物利用度為129.67