1、目的：
　?。?）觀察IFN-γ對AR42J細胞急性胰腺炎過程中細胞上清IL-1、IL-6、TNF-α及AMS等炎癥因子的影響，以及凋亡與自噬作用的改變；并探討自噬改變對AR42J細胞炎癥反應(yīng)的影響及IRF-2基因的改變，初步探討自噬機制在急性胰腺炎中的作用和意義。
　?。?）通過構(gòu)建IRF-2基因下調(diào)的細胞模型為研究對象，以轉(zhuǎn)染陰性載體的AR42J細胞作為陰性載體對照組（IRF2-NC），探討IRF-2蛋白表達改變對AR4

2、2J細胞自噬作用與炎癥反應(yīng)的影響，從自噬調(diào)控角度探討IRF-2基因在急性胰腺炎發(fā)生機制中的作用。
　　方法：
　?。?）采用不同濃度梯度的IFN-γ預(yù)處理AR42J細胞，雨蛙素刺激制備急性胰腺炎細胞模型，采用ELISA方法檢測檢測各組細胞上清IL-1、IL-6、TNF-α及AMS的濃度，Western blot方法檢測活化的cleaved Caspase3與Caspase9蛋白的表達。
　　（2）采用不同濃度梯度的IF

3、N-γ預(yù)處理AR42J細胞，雨蛙素刺激制備急性胰腺炎細胞模型，采用透射電鏡的方法觀察細胞內(nèi)自噬體形成情況。采用Western blot方法檢測自噬調(diào)控基因LC3II/I、Beclin1、LAMP2、Cathepsin B表達的改變。
　　（3）采用自噬抑制劑3-MA預(yù)處理AR42J細胞，然后加入雨蛙素至細胞中制備急性胰腺炎細胞模型，采用Western blot方法檢測自噬調(diào)控基因LC3II/I、Beclin1表達的改變。采用ELI

4、SA方法檢測檢測各組細胞上清中IL-1、IL-6、TNF-α及AMS的濃度，并采用Western blot方法檢測IRF-2表達的改變。
　?。?）采用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式構(gòu)建IRF-2基因表達下調(diào)的AR42J細胞株，應(yīng)用RT-PCR與Western blot方法對基因表達進行鑒定，以轉(zhuǎn)染陰性載體的AR42J細胞作為陰性載體對照組（IRF2- NC），采用雨蛙素造模的方法至以上構(gòu)建的各組細胞中制備急性胰腺炎細胞模型，采用Western

5、 blot方法檢測自噬調(diào)控基因LC3II/I、Beclin1及IRF-2蛋白表達的改變。采用ELISA方法檢測檢測各組細胞上清中IL-1、IL-6、TNF-α及AMS的濃度。
　　結(jié)果：
　?。?）ELISA方法檢測發(fā)現(xiàn)，未采用IFN-γ預(yù)處理的細胞炎癥因子大量釋放，而當IFN-γ濃度依次升高時，各組細胞上清IL-1、IL-6、TNF-α及AMS的濃度逐漸下降，濃度值均明顯低于對照組細胞（P<0.05）。采用Western

6、blot方法檢測活化的cleaved Caspase3與Caspase9蛋白的表達結(jié)果，活化的cleaved caspase3與Caspase9蛋白在以上各組均無表達，無明顯差異。
　　（2）采用透射電鏡的方法觀察發(fā)現(xiàn)，急性胰腺炎初期，采用IFN-γ預(yù)處理細胞中自噬小體數(shù)量明顯增加，自噬小體數(shù)量明顯高于對照組。當IFN-γ濃度依次升高時，LC3II/I、Beclin1、LAMP2、Cathepsin B表達逐漸升高，均明顯高于對照

7、組細胞。
　?。?）3-MA對細胞內(nèi)自噬具有抑制作用；當自噬機制受抑制時，IL-1、IL-6、TNF-α及AMS細胞炎性因子釋放增加。當IFN-γ濃度依次升高時，IRF-2表達逐漸升高。
　　（4）采用慢病毒轉(zhuǎn)染的方式構(gòu)建IRF-2基因表達下調(diào)的AR42J細胞株并應(yīng)用RT-PCR與Western blot方法鑒定。當IRF-2蛋白表達下調(diào)后，LC3II/I、Beclin1蛋白表達在急性胰腺炎組明顯降低；當自噬機制受抑制時，各

8、組細胞炎癥反應(yīng)增強，上清中IL-1、IL-6、TNF-α及AMS等炎性因子釋放增加。
　　結(jié)論：
　?。?）IFN-γ可能對AR42J細胞具有抑制炎性反應(yīng)的作用，該作用可能通過增強細胞內(nèi)自噬活性實現(xiàn)。自噬機制對AR42J細胞炎性反應(yīng)具有保護作用，干擾素調(diào)節(jié)因子IRF-2可能參與細胞自噬機制的調(diào)控及炎癥反應(yīng)的變化過程。
　　（2）當IRF-2蛋白表達下調(diào)后，LC3II/I、Beclin1自噬相關(guān)蛋白表達明顯降低；當自噬機