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文檔簡介
1、X-射線晶體衍射分析在分子生物學中起著非常重要的作用,因此需要有適合做衍射分析的蛋白質晶體。然而,生物大分子的許多特性不同于有機和無機的小分子,例如:靜電學性質、較復雜的形狀及物理化學不穩(wěn)定性等等,這就使生物大分子的結晶過程變得較為復雜。因此,獲得質量完美的蛋白質晶體成為蛋白質結構測定的主要瓶頸,需要探索新的結晶方法以制備蛋白質等生物大分子晶體。用膜結晶技術結晶蛋白質可得到適合于衍射分析的大分子蛋白質晶體。 本文首先采用了聚偏氟
2、乙烯中空纖維微孔膜對真空膜結晶溶菌酶進行了實驗研究??疾炝四は掠握婵斩?、蛋白質濃度、料液流速、添加劑、pH和離子強度對溶劑跨膜通量及溶菌酶晶體質量的影響。結果表明:真空度應控制在0.015MPa左右;溶菌酶真空膜結晶的最佳濃度為20mg·mL<'-1>;結晶溶液的流速以288μm·s<'-1>為宜;結晶溶液中加入一定添加劑如丙三醇、DMSO等,可以有效提高溶劑跨膜通量,改善晶體質量;在相同離子強度下,pH值越大膜通量越低,在不同的pH值
3、下可以得到不同形狀的晶體。 另外,本文用滲透膜結晶法進行了其它幾種蛋白質(牛血清白蛋白V、脂肪酶)的膜結晶,研究了操作條件對蛋白質滲透膜結晶過程的影響,優(yōu)化了幾種蛋白質的結晶條件,評價了不同結晶條件下的溶劑跨膜通量,探討了沉淀劑和添加劑對蛋白質滲透膜結晶的作用機理,并對最后得到的蛋白質晶體進行了初步分析。實驗結果表明:對于牛血清白蛋白V的滲透膜結晶過程,最佳結晶條件為17~25℃,pH6.3的KH<,2>PO<,4>-Na<,2
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