1、目的:觀察自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneously hypertensive rats，SHR)和Wistar-Kyoto(WKY)大鼠腎臟皮質(zhì)組織microRNA-29b(miR-29b)表達(dá)是否存在差異，探討miR-29b在血管緊張素Ⅱ(angiotensinⅡ，AngⅡ)誘導(dǎo)腎臟纖維化中的作用。
　　 方法:實(shí)時(shí)定量PCR(real-time quantitative polymerase chain reaction

2、，RT-qPCR)檢測(cè)SHR大鼠和WKY大鼠腎臟皮質(zhì)組織miR-29b表達(dá)的差異。
　　 體外培養(yǎng)大鼠腎小管上皮細(xì)胞株(NRK-52E細(xì)胞)和大鼠腎間質(zhì)成纖維細(xì)胞(NRK-49F細(xì)胞)，給予AngⅡ10-7mol/L（為AngⅡ組），以正常培養(yǎng)的細(xì)胞做空白對(duì)照，RT-qPCR檢測(cè)AngⅡ組和正常對(duì)照組細(xì)胞miR-29b表達(dá)差異，運(yùn)用Western Bolt技術(shù)和RT-qPCR技術(shù)分別檢測(cè)AngⅡ組和空白對(duì)照組NRK-52E細(xì)胞內(nèi)

3、轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β(TGF-β)，α肌動(dòng)蛋白(α-SMA)，Ⅰ型膠原蛋白(ColⅠ)以及NRK-49F細(xì)胞內(nèi)TGF-β，ColⅠ，金屬基質(zhì)蛋白酶-2(MMP-2)的表達(dá)差異，運(yùn)用ELISA檢測(cè)NRK-49F細(xì)胞MMP-2的表達(dá)。
　　 NRK-52E細(xì)胞和NRK-49F細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-29b inhibitor，建立miR-29b低表達(dá)細(xì)胞模型，實(shí)驗(yàn)分三組:①空白對(duì)照組:正常培養(yǎng)的細(xì)胞未經(jīng)任何處理;②低表達(dá)組:轉(zhuǎn)染miR-29b i

4、nhibitor;③陰性對(duì)照組:轉(zhuǎn)染隨機(jī)合成NCmicroRNA片段。
　　 NRK-52E細(xì)胞和NRK-49F細(xì)胞再轉(zhuǎn)染miR-29bmimics，建立miR-29b高表達(dá)模型，24h后給予AngⅡ10-7mol/L，實(shí)驗(yàn)分三組:①空白對(duì)照組:細(xì)胞給予AngⅡ誘導(dǎo);②高表達(dá)組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染miR-29b mimcs，再給予AngⅡ誘導(dǎo);③陰性對(duì)照組:細(xì)胞轉(zhuǎn)染隨機(jī)合成NCmicroRNA片段，再給予AngⅡ誘導(dǎo)。
　　 用流

5、式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)轉(zhuǎn)染率，用RT-qPCR檢測(cè)轉(zhuǎn)染效果，運(yùn)用Western Bolt技術(shù)和RT-qPCR技術(shù)分別檢測(cè)各組中NRK-52E細(xì)胞TGF-β，α-SMA、ColⅠ的表達(dá)差異以及NRK-49F細(xì)胞TGF-β，ColⅠ，MMP-2的表達(dá)差異，運(yùn)用ELISA檢測(cè)NRK-49F細(xì)胞MMP-2的表達(dá)。
　　 結(jié)果:
　　 1、相比較WKY大鼠，SHR大鼠腎臟皮質(zhì)組織miR-29b表達(dá)下降（P＜0.05）。
　　 2

6、、無論是NRK-52E細(xì)胞還是NRK-49F細(xì)胞，相對(duì)空白對(duì)照組，AngⅡ組miR-29b明顯下降（P＜0.05），TGF-β、α-SMA、COLⅠ的mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。
　　 3、流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測(cè)NRK-52E細(xì)胞和和NRK-49F細(xì)胞轉(zhuǎn)染率分別為95.14％和94.24％。
　　 4、相比空白對(duì)照組，低表達(dá)組miR-29b（0.07±0.02）表達(dá)明顯下降(P＜0.05)，低表達(dá)組的NR

7、K-52E細(xì)胞α-SMA、TGF-β、COLⅠ的表達(dá)比空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組均上調(diào)（P＜0.05），而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。低表達(dá)組的NRK-49F細(xì)胞TGF-β、COLⅠ和MMP-2的表達(dá)比空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組均上調(diào)（P＜0.05），而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)5、相比空白對(duì)照組，高表達(dá)組miR-29b表達(dá)明顯升高（P＜0.05）。高表達(dá)組的NRK-52E細(xì)胞α-SM

8、A，TGF-β，COLⅠ的mRNA表達(dá)和蛋白表達(dá)比空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組均下調(diào)（P＜0.05），而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。高表達(dá)組的NRK-49F細(xì)胞TGF-β，COLⅠ和MMP-2的表達(dá)比空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組均下調(diào)(P＜0.05)，而空白對(duì)照組和陰性對(duì)照組間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)
　　 結(jié)論:SHR大鼠腎臟皮質(zhì)組織miR-29b的表達(dá)水平比WKY大鼠下降，這可能和SHR大鼠體內(nèi)的高