1、蛇毒中分泌型磷脂酶A2被廣泛用來作為藥理學工具，以研究它們在各種不同的病理生理過程中的作用。其中，部分分泌型磷脂酶A2被發(fā)現具有阻斷電壓門控型鉀離子通道(K<,v> channels)的作用。然而，大多數關于其對離子通道作用的研究是通過作用于運動神經末梢間接完成的，極少研究結果是直接作用于神經元細胞的。這里本文報道了一種新的蛇毒分泌型磷脂酶A2神經毒素：natratoxin，它來源于中華眼鏡蛇，在天然狀態(tài)下以單體形式存在。經SDS電泳，

2、該蛋白的分子量為14 kDa左右。根據測定的N端序列和其它蛇毒的同源蛋白的高度保守序列設計了引物，首次從蛇腺中克隆natratoxin全長cDNA，其中360bp為蛋白編碼框，編碼119個氨基酸殘基。全長序列比對顯示它和其他種屬的蛇毒PLA2蛋白有很高的同源性。通過對背根神經節(jié)的神經元全細胞膜片鉗確定了其功能特征，發(fā)現natratoxin有效地抑制了A型鉀電流并改變了通道的門控特性。因此，natratoxin是作為一個K<,v>通道的門

3、控調節(jié)劑起作用的。而且實驗證明這一抑制效應與其酶活性無關。這些結果表明，該毒素通過與Kv通道結合來執(zhí)行其抑制效應。 為了進一步闡明這一電生理現象的結構基礎，對natratoxin的三維結構進行了研究。在高鹽溶液中獲得了單晶，并且收集到2.2A分辨率的晶體衍射數據，晶體的空間群為P4<,1>。利用分子置換的方法獲得了相位，修正了natratoxin的晶體結構。結構分析表明natratoxin單體的結構主要由三個α螺旋和一對反平行β

4、折疊構成，并由14個在一級序列中嚴格保守的半胱氨酸殘基構成的7對二硫鍵穩(wěn)定其結構。在整體結構上，natratoxin作為sPLA2家族的一員是非常保守的，局部上的差異主要位于鈣結合區(qū)域和C末端。然而作為一個K<,v>通道的抑制劑，natratoxin與其它毒素類抑制劑在整體結構上有著巨大的差異。在與其它K<,v>通道抑制劑的比較中我們發(fā)現在natratoxin的C端有一個功能區(qū)域與其它抑制劑有很高的一致性，而這個功能區(qū)域在抑制劑與K<,