1、殼聚糖是甲殼素脫乙?；漠a(chǎn)物，由于獨特的生物活性和生理功能，在農(nóng)業(yè)、工業(yè)、醫(yī)藥等領(lǐng)域都有廣泛用途，近年來已引起眾多領(lǐng)域的關(guān)注，而成為研究的熱點。但殼聚糖不溶于水，使其應(yīng)用受到極大的限制，通過化學(xué)改性，引入親水基團(tuán)，得到水溶性殼聚糖衍生物一直是人們研究的熱點，其中羧甲基殼聚糖(Carboxymethyl chitosan，CMCH)是迄今所報道的600多種甲殼素衍生物中，研究最多的一種水溶性殼聚糖衍生物。它有優(yōu)良的增稠性、分散性、乳化性、

2、保濕性、成膜性、凝膠性等，與殼聚糖比，水溶性提高，并可在廣泛的pH值溶液內(nèi)溶解，且無毒、無味、生物相容性好，可降解，這些豐富而獨特的性質(zhì)使其在諸多領(lǐng)域得到了應(yīng)用。殼聚糖及其衍生物具備含有酰胺、醚鍵、羥基等官能團(tuán)，可作為性能優(yōu)良的凝膠材料，而且根據(jù)對不同條件的敏感要求，可選擇引入不同的官能團(tuán)，且其良好的生物相容性，使其成為研究熱點。溫敏型凝膠材料具備原位凝膠的特性，被應(yīng)用于藥物傳遞，組織工程，細(xì)胞生物學(xué)、生物分離等領(lǐng)域。目前殼聚糖及其衍生

3、物溫敏水凝膠材料的研究主要有殼聚糖和丙烯酸與N-異丙基丙烯酰胺共聚；殼聚糖-β甘油磷酸鹽溫敏性凝膠，而β甘油磷酸鹽價格較貴，制作溫敏凝膠的成本較高。 本論文利用氯乙酸和殼聚糖在濃堿液中適當(dāng)控制反應(yīng)條件制備出5個CMCH樣品，通過紅外光譜檢測、電位滴定檢測樣品的物理化學(xué)性質(zhì)；并通對三種細(xì)胞——MEF、MPM、Hela，的作用探討了CMCH的細(xì)胞活性；探討用αβ-甘油磷酸、殼聚糖為原料，制備殼聚糖凝膠體系，并探討其溫敏特性和緩釋性能

4、，及其細(xì)胞相容性，為其應(yīng)用提供理論依據(jù)。 實驗結(jié)果如下： 1．制備的5個CMCH樣品均具有良好的水溶性、相似的分子結(jié)構(gòu)和較高的DS(1.12-2.39)，且與相應(yīng)的原料殼聚糖相比，羧甲基化前后，脫乙酰度基本保持穩(wěn)定。 2．5個CMCH樣品均具有促進(jìn)MEF細(xì)胞增殖的活性。用MTT-CVS檢測細(xì)胞增殖的實驗說明不同MW的CMCH對MEF細(xì)胞增殖的作用情況相似；CMCH樣品(DD 70.3-79.9％，DS 1.12-

5、1.26)促進(jìn)MEF細(xì)胞增殖的最小濃度是50μg/ml。高DD的CMCH樣品有較強(qiáng)的促進(jìn)細(xì)胞增殖的能力，在DD從70.3％增至93.6％時，CMCH的促進(jìn)MEF細(xì)胞增殖的活性也隨之增強(qiáng)。DS是對CMCH的促進(jìn)MEF細(xì)胞增殖的生物活性中尤為重要的結(jié)構(gòu)參數(shù)，具有高DS的CMCH，其對MEF細(xì)胞增殖的促進(jìn)作用越強(qiáng)。 3．5個CMCH樣品處理MPM細(xì)胞24h，對其存活率沒有影響；CMCH能促進(jìn)MPM細(xì)胞吞噬中性紅的作用，并誘導(dǎo)體外培養(yǎng)的

6、MPM細(xì)胞產(chǎn)生NO，且10μg/ml濃度處理組MPM細(xì)胞產(chǎn)生的NO比100μg/ml濃度處理組的略高。說明CMCH能活化巨噬細(xì)胞，增強(qiáng)巨噬細(xì)胞的吞噬活力，并產(chǎn)生生物活性物質(zhì)。 4．5個CMCH樣品在體外對Hela細(xì)胞有輕微的抑制增殖作用趨勢，且濃度在100μg/ml的CMCH對Hela細(xì)胞的增殖抑制作用比10μg/ml濃度時明顯。 5．殼聚糖溶液及甘油磷酸鈉溶液采用同時冰浴的方法制備了CS-αβ-GP凝膠，該凝膠在37℃