1、研究背景
　　 由創(chuàng)傷、炎癥、腫瘤等各種原因造成的骨不連、骨缺損一直是骨科治療領(lǐng)域的難題，采取何種材料進(jìn)行骨移植術(shù)一直是研究領(lǐng)域的重點(diǎn)。隨著技術(shù)的發(fā)展，利用骨組織工程的方法或基因治療的方法修復(fù)骨缺損、骨不連引起人們高度重視。
　　 將種子細(xì)胞種植于一種生物相容性良好并可被人體逐漸降解吸收的生物材料上，當(dāng)種子細(xì)胞擴(kuò)增并形成細(xì)胞/生物材料結(jié)構(gòu)后，再回植到體內(nèi)，使受損組織得到修復(fù)，這是組織工程的常用方法。利用注射的方法，可注射

2、型水凝膠在注射處原位形成生物支架，為細(xì)胞提供生存所需的三維空間，同時(shí)也減輕了植入方法對(duì)周?chē)M織造成的損傷。
　　 近年來(lái)，組織工程用水凝膠生物材料的研制發(fā)展迅速。許多研究表明，殼聚糖水凝膠是一類(lèi)生物相容性好、可體內(nèi)降解的生物材料，作為組織工程細(xì)胞支架具有廣泛的應(yīng)用前景。目前溫敏性殼聚糖復(fù)合軟骨細(xì)胞以注射形式修復(fù)軟骨缺損有較多研究報(bào)道，但溫敏性殼聚糖復(fù)合成骨細(xì)胞體外構(gòu)建人工骨組織并對(duì)骨不連、骨缺損進(jìn)行微創(chuàng)治療的研究相對(duì)缺乏。

3、>　　 目的
　　 觀察成骨細(xì)胞在溫敏性殼聚糖水凝膠中的生長(zhǎng)情況，驗(yàn)證溫敏性殼聚糖水凝膠對(duì)成骨細(xì)胞的毒性，為骨不連、骨缺損微創(chuàng)治療提供依據(jù)。
　　 方法
　　 本實(shí)驗(yàn)首先利用組織塊培養(yǎng)法成功分離并培養(yǎng)出了SD大鼠成骨細(xì)胞，并對(duì)其進(jìn)行了組織學(xué)鑒定；其次，制備出了具備良好溫敏特性的殼聚糖水凝膠，將溫敏性殼聚糖植入大鼠大腿肌肉中，檢測(cè)其組織相容性；并且以溫敏性殼聚糖水凝膠為支架，將成骨細(xì)胞復(fù)合該支架進(jìn)行培養(yǎng)，體外構(gòu)建

4、人工骨組織，對(duì)其進(jìn)行顯微鏡下觀察成骨細(xì)胞在溫敏性殼聚糖中生存、擴(kuò)增情況；最后，配制出四種不同濃度的溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液，并使用該浸提液進(jìn)行對(duì)成骨細(xì)胞的毒性試驗(yàn)。實(shí)驗(yàn)分為三組即完全培養(yǎng)基組（陰性對(duì)照組）、不同濃度溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液組（實(shí)驗(yàn)組）、純鉛材料浸提液組（陽(yáng)性對(duì)照組）。用SD大鼠成骨細(xì)胞在不同濃度的溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液中體外培養(yǎng)24h、48h、72h、96h，用MTT法測(cè)定細(xì)胞相對(duì)增殖率(RGR)，判斷細(xì)胞毒性的級(jí)別。

5、
　　 結(jié)果
　　 溫敏性殼聚糖植入大鼠大腿肌肉后，逐漸出現(xiàn)炎癥反應(yīng)，無(wú)論是溫敏性殼聚糖降解時(shí)間還是炎癥反應(yīng)消退時(shí)間均少于8周；SD大鼠成骨細(xì)胞在溫敏性殼聚糖水凝膠中培養(yǎng)24小時(shí)內(nèi)鏡下觀察呈圓形，48小時(shí)后開(kāi)始伸出觸角并擴(kuò)增；在溫敏性殼聚糖水凝膠浸提液中培養(yǎng)的各組細(xì)胞在不同時(shí)間點(diǎn)相對(duì)增殖率均在92％-112％之間，通過(guò)分析各組MTT檢測(cè)吸光度值，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，在各個(gè)不同的時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)，無(wú)論是高濃度的浸提液還是低濃度的浸提液